Recombinant Human Tropomyosin 3规格
重组人源原肌球蛋白3（Recombinant Human Tropomyosin 3，简称TPM3），亦称α-原肌球蛋白3，是一种利用大肠杆菌（E. coli）或哺乳动物细胞（如HEK293T）表达系统制备的高纯度细胞骨架蛋白（单体分子量约32-33 kDa，全长约248-285个氨基酸）。作为原肌球蛋白家族的关键成员，TPM3通过形成卷曲螺旋二聚体结合于肌动蛋白丝（F-actin）表面，在维持细胞骨架稳定性、调节肌动蛋白与其他蛋白相互作用以及控制肌肉收缩（骨骼肌、心肌及平滑肌）中发挥核心作用；
商品介绍：
A-01K100294-50μg | Recombinant Human Tropomyosin 3规格 |
A-01K100294-200ug | Recombinant Human Tropomyosin 3规格 |
A-01K100294-1mg | Recombinant Human Tropomyosin 3规格 |
别称：Alpha tropomyosin 3, Alpha tropomyosin slow skeletal, CFTD, Cytoskeletal tropomyosin TM30, FLJ41118, gamma TM, Gamma tropomyosin, Gamma-tropomyosin, Heat stable cytoskeletal protein 30 kDa, hscp30, hTM30nm, hTM5, hTMnm, MGC102590, MGC14582, MGC3261, MGC72094, NEM1, OK/SW-cl.5, OTTHUMP00000034019, OTTHUMP00000034171, OTTHUMP00000034172, TM 5, TM-5, TM3, TM30, TM30nm, TM5, Tm5NM, Tpm 5, TPM3
标签：Western Blot，ELISA
种属：Human
宿主：E.Coli
表达区间：1-248
分子量：27.2 kDa
Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
应用：Western Blot, ELISA
性状：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
纯度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
检测原理详解：
包被抗体结合
实验开始前，微孔板已预先包被抗人白脂素单克隆抗体。当加入待测样本后，
样本中的人白脂素（Asprosin）会与固相载体上的捕获抗体特异性结合。
形成“夹心复合物”
洗涤去除未结合物质后，加入生物素标记的检测抗体，该抗体与白脂素分子的另一表位结合，
形成“固相抗体—抗原—检测抗体”三明治结构。
酶促显色反应
随后加入?辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，与生物素检测抗体结合。
最后加入TMB显色底物，在HRP催化下产生蓝色产物，反应终止后变为黄色。
浓度定量分析
黄色深浅与样本中白脂素含量成正比，通过酶标仪在450nm波长处测定吸光度（OD值），
并根据标准曲线计算出样本中白脂素的浓度。
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实验步骤：
1. 基因克隆与表达载体构建
从人类FBN1基因C端序列中扩增Asprosin编码片段（约140aa）。
将目的片段插入原核表达载体，确保带有?N端或C端His标签，便于后续纯化。
转化至?感受态细胞，筛选阳性克隆并测序验证。
2. 重组蛋白诱导表达
取阳性菌落接种于LB培养基（含氨苄青霉素），37℃振荡培养过夜。
次日按1:100比例转接至新鲜LB培养基，37℃培养至OD600达0.6–0.8。
加入IPTG至终浓度0.1–1.0 mM，16–25℃诱导表达6–12小时（低温诱导有助于可溶性达）。
4℃、8000×g离心10分钟收集菌体，弃上清，-20℃保存备用。
3. 菌体裂解与蛋白提取
将菌体沉淀重悬于裂解缓冲液（如PBS + 1% Triton X-100 + 蛋白酶抑制剂），超声破碎
（冰浴条件下，每次30秒，共6–10次，功率30%）。
4℃、12000×g离心20分钟，收集上清（可溶性蛋白）或沉淀（包涵体蛋白）。
若为包涵体蛋白，需用?洗涤缓冲液（含2M尿素的PBS）洗涤2–3次，去除杂蛋白。
4. 亲和层析纯化（Ni-NTA法）
将含His标签的蛋白溶液（或溶解后的包涵体蛋白，使用含6–8M尿素的缓冲液溶解）上样至?Ni-NTA亲和层析柱。
用?洗涤缓冲液（含20–40mM咪唑）洗去非特异性结合蛋白。
用?洗脱缓冲液（含250–500mM咪唑）梯度洗脱目标蛋白，收集洗脱峰。
透析去除尿素与咪唑（使用PBS或生理缓冲液，4℃过夜，更换3次）。
5. 蛋白复性（针对包涵体蛋白）
若蛋白以包涵体形式表达，需在纯化后进行?梯度复性：
将变性蛋白缓慢加入含?梯度降低尿素（6M → 4M → 2M → 0M）的复性缓冲液中，4℃搅拌过夜。或采用?透析法?逐步去除变性剂。复性后再次离心取上清，检测蛋白活性。
关键字： Tropomyosin 3;Human;E.Coli;
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