新城疫病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

新城疫病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒(不含内参) 

产品及特点     
新城疫病毒(Newcastle Disease Virus, NDV)，也叫禽副粘病毒1型，属于副黏病毒科禽副黏病毒属。新城疫病毒是ssRNA病毒，有包膜，病毒颗粒具多形性，有圆形、椭圆形和长杆状等，成熟的病毒粒子直径100～400nm。新城疫病毒对外界环境的抵抗力较强，55℃作用45min和直射阳光下作用30min才被灭活。病毒在4℃中存放几周，在-20℃中存放几个月或在-70℃中存放几年，其感染力均不受影响。新城疫是由新城疫病毒中强毒株引起禽的一种高度接触性染病，以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征，具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传染病。世界动物卫生组织将其列为法定报告疫病，我国将其列为一类进境动物疫病。因此对新城疫病毒的快速灵敏诊断具有重要意义。本产品以探针法荧光定量RT-PCR技术为基础开发的专门检测新城疫病毒的试剂盒，它有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。

2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/μL。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据新城疫病毒RNA高度保守区设计，不会跟其他的RNA发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6. 本产品足够50次20μL体系的探针法qRT-PCR反应。
7. 本产品只能用于科研。
规格及成分

稀释标准曲线样品

（以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。

2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。

3. 在6号管中加入5μL1×10E7拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在5号管中加入5μL1×10E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在4号管中加入5μL1×10E5拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。。

样品RNA的制备

7. 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是样品制备PC（样品制备阳性对照），一个是样品制备NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为样品制备PC。另外用水作为样品制备NC。

8. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。
数据处理

1. 如果样本制备阳性对照或RT-PCR阳性对照(包括标曲样本)结果为阴性，则整个实验无效，不需要分析数据，需要重新样本制备，重新进行RT-PCR扩增或跟厂家联系。如果样本制备阴性对照或RT-PCR阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系。

2. 如果阴性对照和阳性对照均正常，则实验有效，可以进入后续分析。

3. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。

4. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须没有读数，或者大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40。对待测样品，如果其Ct没有读数、大于或等于40则均为阴性，如果小于40则为阳性。
自备试剂
样品RNA，超纯水。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年。