微小细胞血症相关转录因子抗体
原理特点
靶向MAF（Musculoaponeurotic fibrosarcoma）转录因子家族成员。MAF蛋白属于碱性亮氨酸拉链转录因子，在红细胞终末分化、晶状体发育和T细胞功能中发挥关键调控作用。该抗体用于研究红细胞生成和MAF相关肿瘤。
英文名称:MITF Rabbit pAb
中文名称:微小细胞血症相关转录因子抗体
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文别名:MITF_HUMAN; Microphthalmia-associated transcription factor; BHLHE32; Class E basic helix-loop-helix protein 32(bHLHe32); MI; WS2; CMM8; WS2A; COMMAD; MITF-A;
交叉反应:Human,Mouse
抗体来源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human MITF
亚型:IgG
性状:Liquid
纯化方法:affinity purified by Protein A
克隆类型:Polyclonal
理论分子量：59 kDa
浓度：1mg/ml
储存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事项：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶点背景
MITF 属于 MiT 家族 bHLH 转录因子，黑素细胞、破骨细胞、肥大细胞、视网膜色素上皮细胞谱系主控因子。
调控黑素合成、黑素细胞存活增殖；调控破骨细胞分化骨吸收功能；参与心脏、肾细胞发育。
黑色素瘤特征性标志物，分型诊断、转移风险判断；抗体用于区分黑色素瘤与其他上皮、间质肿瘤。
核心实验操作方法
1. Western Blot（WB）
抗体孵育
一抗孵育：用5%脱脂牛奶或BSA稀释抗体至推荐浓度（如1:1000），4℃摇床缓慢孵育过夜；或室温孵育1-2小时，孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中。
洗涤：用TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟，洗去未结合的一抗；加入HRP标记二抗（1:5000-1:10000稀释），室温孵育1小时。
显影：再次洗涤后，加入ECL发光液孵育1-2分钟，用化学发光成像仪采集图像，根据信号强度调整曝光时间。
2. 免疫组化（IHC）
抗体孵育
一抗孵育：滴加稀释后的一抗（如1:200）于组织切片上，置于湿盒中4℃孵育过夜；次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入生物素标记二抗（1:200）室温孵育30分钟，PBS冲洗后加入ABC复合物（1:100）室温孵育30分钟。
显色封片：DAB显色剂显色3-10分钟（显微镜下观察控制时间），苏木素复染1分钟，梯度乙醇脱水后中性树胶封片。
3. 免疫荧光（IF）
抗体孵育
一抗孵育：用5% BSA稀释抗体至工作浓度（如1:100），滴加在细胞爬片上，4℃避光孵育过夜；室温复温后PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入荧光标记二抗（如FITC标记抗兔IgG，1:200），室温避光孵育30-60分钟；PBS冲洗后用抗淬灭封片液封片。
观察：荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察，激发波长根据二抗标记物选择（如FITC为488nm）。
4. ELISA实验
包被与孵育
包被：用包被缓冲液（pH9.6碳酸盐缓冲液）稀释抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃过夜孵育。
封闭与一抗孵育：弃去包被液，PBST洗涤3次，加入5% BSA封闭液200μl/孔，37℃孵育1小时；加入稀释后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。
检测：洗涤后加入酶标二抗（1:5000），37℃孵育1小时；TMB底物溶液显色10-30分钟，2M硫酸终止反应后，酶标仪450nm波长读取OD值。
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