产品属性
产品名称 | 硝基酪氨酸/硝基化酪氨酸抗体 | 货号 | YS-K7616 |
英文名称 | 3-Nitrotyrosine Rabbit pAb | 用途 | 仅供科研实验 |
商品介绍
产品应用:
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文别名:NO tyrosine; nTyr; Nitrotyrosine; nitro-Tyrosine; nitro Tyrosine.
交叉反应:Species independent
抗体来源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated Nitrotyrosine
亚型:IgG
性状:Liquid
纯化方法:affinity purified by Protein A
克隆类型:Polyclonal
理论分子量：None
浓度：1mg/ml
储存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事项：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
原理特点
靶向硝基酪氨酸，是蛋白质酪氨酸残基被过氧亚硝酸盐硝基化形成的翻译后修饰。它是氧化/硝化应激的生物标志物，反映一氧化氮和超氧阴离子的过量产生。该抗体用于检测组织中的硝化应激水平，研究炎症和神经退行性疾病。
靶点背景
蛋白质酪氨酸残基被活性氮自由基（ONOO⁻、NO₂・）硝基修饰生成 NT，是细胞氧化亚硝化应激通用生物标记。
炎症、缺血、衰老、糖尿病、神经退行病中 NO 与 ROS 大量生成，蛋白广泛硝基化，破坏酶活性、骨架蛋白、受体功能。
NT 免疫染色 / 定量常用于评估组织氧化损伤程度，心肌梗死、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病病灶 NT 水平显著升高。
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核心实验操作方法
1. Western Blot（WB）
抗体孵育
一抗孵育：用5%脱脂牛奶或BSA稀释抗体至推荐浓度（如1:1000），4℃摇床缓慢孵育过夜；或室温孵育1-2小时，孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中。
洗涤：用TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟，洗去未结合的一抗；加入HRP标记二抗（1:5000-1:10000稀释），室温孵育1小时。
显影：再次洗涤后，加入ECL发光液孵育1-2分钟，用化学发光成像仪采集图像，根据信号强度调整曝光时间。
2. 免疫组化（IHC）
抗体孵育
一抗孵育：滴加稀释后的一抗（如1:200）于组织切片上，置于湿盒中4℃孵育过夜；次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入生物素标记二抗（1:200）室温孵育30分钟，PBS冲洗后加入ABC复合物（1:100）室温孵育30分钟。
显色封片：DAB显色剂显色3-10分钟（显微镜下观察控制时间），苏木素复染1分钟，梯度乙醇脱水后中性树胶封片。
3. 免疫荧光（IF）
抗体孵育
一抗孵育：用5% BSA稀释抗体至工作浓度（如1:100），滴加在细胞爬片上，4℃避光孵育过夜；室温复温后PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入荧光标记二抗（如FITC标记抗兔IgG，1:200），室温避光孵育30-60分钟；PBS冲洗后用抗淬灭封片液封片。
观察：荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察，激发波长根据二抗标记物选择（如FITC为488nm）。
4. ELISA实验
包被与孵育
包被：用包被缓冲液（pH9.6碳酸盐缓冲液）稀释抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃过夜孵育。
封闭与一抗孵育：弃去包被液，PBST洗涤3次，加入5% BSA封闭液200μl/孔，37℃孵育1小时；加入稀释后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。
检测：洗涤后加入酶标二抗（1:5000），37℃孵育1小时；TMB底物溶液显色10-30分钟，2M硫酸终止反应后，酶标仪450nm波长读取OD值。
关键字： 硝基酪氨酸/硝基化酪氨酸抗体;Rabbit;
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