产品属性

产品名称 | 血小板内皮细胞黏附分子1抗体 | 货号 | YS-K7682 |
英文名称 | CD31 Rabbit pAb | 用途 | 仅供科研实验 |
商品介绍

产品应用:

Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文别名:platelet endothelial cell adhesion molecule precursor-1; PECAM-1; PECAM1; Adhesion molecule; CD31 antigen; CD31 EndoCAM; Endocam; FLJ34100; FLJ58394; GPIIA; Pecam 1; PECA1_HUMAN; PECAM 1 CD31 EndoCAM; PECA1; Pecam1; Platelet endothelial cell adhesion molecule; Platelet/endothelial cell adhesion molecule 1; Adhesion molecule; Platelet/endothelial cell adhesion molecule.
交叉反应:Human
抗体来源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human CD31
亚型:IgG
性状:Liquid
纯化方法:affinity purified by Protein A
克隆类型:Polyclonal
克隆号:None
理论分子量:78 kDa
浓度:1mg/ml
储存液:0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件:Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事项:This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
原理特点

检测CD31总蛋白水平。CD31在血管内皮细胞间连接处富集,参与机械信号传导和炎症细胞迁移。该抗体广泛用于免疫组化中血管密度评估和内皮细胞鉴定。
靶点背景

胞内段携带免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM),负调控内皮过度活化、抑制炎症信号放大。
胚胎血管发育必需,敲除 CD31 小鼠出现血管渗漏、出血、胚胎发育不全。
病理状态下 CD31 表达下降提示内皮损伤,动脉粥样硬化、移植排斥、脓毒症内皮屏障破坏。
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样本处理与实验操作

1. Western Blot(免疫印迹)
样本制备
细胞样本:PBS洗涤2-3次,加入RIPA裂解液(含1% PMSF和磷酸酶抑制剂),冰上裂解30分钟,12000rpm离心15分钟取上清,BCA法定量蛋白浓度
组织样本:液氮研磨成粉末,加入裂解液冰上裂解,离心后取上清,调整蛋白浓度至一致
变性处理:加入5×SDS上样缓冲液,95℃加热5-10分钟,冷却后上样
抗体孵育
转膜完成后,用5% BSA或牛奶封闭液室温封闭1-2小时
一抗稀释后4℃孵育过夜(12-16小时),或室温孵育1-2小时;孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中
TBST缓冲液洗涤3次,每次5分钟;加入二抗(1:5000-1:10000稀释)室温孵育1-2小时
再次洗涤后,用ECL发光液显影,通过凝胶成像系统采集图像
2. IHC-P(石蜡切片免疫组化)
样本前处理
脱蜡水化:依次放入二甲苯(2次,每次10分钟)、无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇(各5分钟),最后用PBS冲洗
抗原修复:将切片放入柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)中,微波炉加热至沸腾,保持10-15分钟,自然冷却至室温
封闭处理:3% H₂O₂室温孵育10分钟灭活内源性过氧化物酶,PBS冲洗后用10%山羊血清封闭30分钟
抗体孵育
一抗稀释后滴加在切片上,4℃孵育过夜;孵育时置于湿盒中,防止液体挥发
次日室温复温30分钟,PBS冲洗3次,每次5分钟;加入二抗(生物素标记)室温孵育30分钟
PBS冲洗后,加入ABC复合物室温孵育30分钟,DAB显色剂显色(显微镜下观察控制时间,通常3-10分钟),苏木素复染后脱水封片
3. ICC/IF(细胞免疫荧光)
样本制备
细胞爬片培养至70-80%汇合度,PBS洗涤2次,4%多聚甲醛固定15-20分钟
通透处理(根据抗体类型选择):0.1% Triton X-100室温孵育10分钟,PBS冲洗3次
封闭处理:5% BSA室温封闭30-60分钟,减少非特异性结合
抗体孵育
一抗稀释后滴加在爬片上,4℃孵育过夜,或室温孵育1-2小时
PBS冲洗3次,每次5分钟;加入荧光标记二抗(1:200-1:500稀释),室温避光孵育30-60分钟
再次冲洗后,用抗淬灭封片液封片,荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察采集图像
4. ELISA(酶联免疫吸附试验)
包被与封闭
用包被缓冲液(如碳酸盐缓冲液pH9.6)稀释抗原至合适浓度,每孔加入100μl,4℃包被过夜
弃去包被液,PBST洗涤3次,每次3分钟;加入封闭液(5% BSA)每孔200μl,37℃孵育1-2小时
抗体孵育
一抗按比例稀释后,每孔加入100μl,37℃孵育1-2小时,或4℃孵育过夜
PBST洗涤3次,加入稀释好的酶标二抗,每孔100μl,37℃孵育1小时
洗涤后加入底物溶液(如TMB)每孔100μl,37℃避光显色10-20分钟,加入终止液(2M H₂SO₄),用酶标仪在450nm波长读取OD值
关键字: 血小板内皮细胞黏附分子1抗体;Rabbit;78 kDa;
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