早期内吞体相关蛋白1抗体
原理特点
靶向EEA1,是早期内吞体的标志蛋白。它通过FYVE结构域结合PI3P,锚定在内吞体膜上,介导内吞小泡的栓系和融合。该抗体用于研究内吞途径、膜运输和受体信号调控。
英文名称:EEA1 Rabbit pAb
中文名称:早期内吞体相关蛋白1抗体

Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文别名:Early endosome antigen 1; Early endosome antigen 1, 162kD; Early endosome associated protein; EEA 1; EEA1; EEA1_HUMAN; Endosome associated protein p162; Endosome-associated protein p162; MST105; MSTP105; ZFYVE2; Zinc finger FYVE domain containing protein 2; Zinc finger FYVE domain-containing protein 2.
交叉反应:Human,Hamster
抗体来源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human EEA1
亚型:IgG
性状:Liquid
纯化方法:affinity purified by Protein A
克隆类型:Polyclonal
理论分子量:162 kDa
浓度:1mg/ml
储存液:0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件:Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事项:This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶点背景
EEA1 是早期内吞体标志性支架蛋白,结合 Rab5-GTP 锚定膜结构,调控胞吞物质分选、早期内吞体融合成熟。
介导生长因子受体、营养物质、病毒颗粒胞内转运;肿瘤细胞上调 EEA1 增强受体循环,放大 EGFR、整合素促转移信号。
经典早期内吞体荧光标记物,免疫荧光可清晰标记早期胞吞囊泡,用于胞吞、膜转运、病毒入侵机制实验。
核心实验操作方法
1. Western Blot(WB)
抗体孵育
一抗孵育:用5%脱脂牛奶或BSA稀释抗体至推荐浓度(如1:1000),4℃摇床缓慢孵育过夜;或室温孵育1-2小时,孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中。
洗涤:用TBST缓冲液洗涤3次,每次5分钟,洗去未结合的一抗;加入HRP标记二抗(1:5000-1:10000稀释),室温孵育1小时。
显影:再次洗涤后,加入ECL发光液孵育1-2分钟,用化学发光成像仪采集图像,根据信号强度调整曝光时间。
2. 免疫组化(IHC)
抗体孵育
一抗孵育:滴加稀释后的一抗(如1:200)于组织切片上,置于湿盒中4℃孵育过夜;次日室温复温30分钟,PBS冲洗3次,每次5分钟。
二抗结合:加入生物素标记二抗(1:200)室温孵育30分钟,PBS冲洗后加入ABC复合物(1:100)室温孵育30分钟。
显色封片:DAB显色剂显色3-10分钟(显微镜下观察控制时间),苏木素复染1分钟,梯度乙醇脱水后中性树胶封片。
3. 免疫荧光(IF)
抗体孵育
一抗孵育:用5% BSA稀释抗体至工作浓度(如1:100),滴加在细胞爬片上,4℃避光孵育过夜;室温复温后PBS冲洗3次,每次5分钟。
二抗结合:加入荧光标记二抗(如FITC标记抗兔IgG,1:200),室温避光孵育30-60分钟;PBS冲洗后用抗淬灭封片液封片。
观察:荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察,激发波长根据二抗标记物选择(如FITC为488nm)。
4. ELISA实验
包被与孵育
包被:用包被缓冲液(pH9.6碳酸盐缓冲液)稀释抗原至1-10μg/ml,每孔加入100μl,4℃过夜孵育。
封闭与一抗孵育:弃去包被液,PBST洗涤3次,加入5% BSA封闭液200μl/孔,37℃孵育1小时;加入稀释后的一抗100μl/孔,37℃孵育1-2小时或4℃过夜。
检测:洗涤后加入酶标二抗(1:5000),37℃孵育1小时;TMB底物溶液显色10-30分钟,2M硫酸终止反应后,酶标仪450nm波长读取OD值。
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