整合素alpha E2(CD103)抗体
原理特点
靶向CD103,是αEβ7整合素的α亚基。它在组织驻留记忆T细胞和树突状细胞上表达,结合E-cadherin介导淋巴细胞在上皮组织的滞留。该抗体是组织驻留免疫细胞的标志物。
英文名称:Integrin alpha E Rabbit pAb
中文名称:整合素alpha E2(CD103)抗体

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Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文别名:Itgae; A530055J10; alpha-E1; alpha-M290; aM290; CD103; MGC183601; antigen CD103, human mucosal lymphocyte antigen 1; alpha polypeptide; ITAE_HUMAN; Integrin alpha-E; HML-1 antigen; Integrin alpha-IEL; Mucosal lymphocyte 1 antigen; Integrin alpha-E heavy chain; integrin alpha-E precursor.
交叉反应:Human,Mouse
抗体来源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human Integrin alpha-E heavy chain
亚型:IgG
性状:Liquid
纯化方法:affinity purified by Protein A
克隆类型:Polyclonal
理论分子量:110/128 kDa
浓度:1mg/ml
储存液:0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件:Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事项:This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶点背景
αEβ7 整合素,αE 亚基即 CD103,主要表达黏膜组织驻留 T 细胞(TRM)、肠道上皮内淋巴细胞,特异性结合上皮 E - 钙粘蛋白锚定黏膜免疫细胞。
肿瘤浸润 CD103+TRM 细胞具备强抗肿瘤杀伤能力,CD103 高浸润提示肺癌、胃癌、乳腺癌患者预后更好、免疫治疗响应更佳。
肿瘤组织驻留杀伤 T 细胞特异性标志物,IHC / 流式评估肿瘤免疫微环境、免疫检查点疗效预测。
样本处理与实验操作
1. Western Blot(免疫印迹)
样本制备
细胞样本:PBS洗涤2-3次,加入RIPA裂解液(含1% PMSF和磷酸酶抑制剂),冰上裂解30分钟,12000rpm离心15分钟取上清,BCA法定量蛋白浓度
组织样本:液氮研磨成粉末,加入裂解液冰上裂解,离心后取上清,调整蛋白浓度至一致
变性处理:加入5×SDS上样缓冲液,95℃加热5-10分钟,冷却后上样
抗体孵育
转膜完成后,用5% BSA或牛奶封闭液室温封闭1-2小时
一抗稀释后4℃孵育过夜(12-16小时),或室温孵育1-2小时;孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中
TBST缓冲液洗涤3次,每次5分钟;加入二抗(1:5000-1:10000稀释)室温孵育1-2小时
再次洗涤后,用ECL发光液显影,通过凝胶成像系统采集图像
2. IHC-P(石蜡切片免疫组化)
样本前处理
脱蜡水化:依次放入二甲苯(2次,每次10分钟)、无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇(各5分钟),最后用PBS冲洗
抗原修复:将切片放入柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)中,微波炉加热至沸腾,保持10-15分钟,自然冷却至室温
封闭处理:3% H₂O₂室温孵育10分钟灭活内源性过氧化物酶,PBS冲洗后用10%山羊血清封闭30分钟
抗体孵育
一抗稀释后滴加在切片上,4℃孵育过夜;孵育时置于湿盒中,防止液体挥发
次日室温复温30分钟,PBS冲洗3次,每次5分钟;加入二抗(生物素标记)室温孵育30分钟
PBS冲洗后,加入ABC复合物室温孵育30分钟,DAB显色剂显色(显微镜下观察控制时间,通常3-10分钟),苏木素复染后脱水封片
3. ICC/IF(细胞免疫荧光)
样本制备
细胞爬片培养至70-80%汇合度,PBS洗涤2次,4%多聚甲醛固定15-20分钟
通透处理(根据抗体类型选择):0.1% Triton X-100室温孵育10分钟,PBS冲洗3次
封闭处理:5% BSA室温封闭30-60分钟,减少非特异性结合
抗体孵育
一抗稀释后滴加在爬片上,4℃孵育过夜,或室温孵育1-2小时
PBS冲洗3次,每次5分钟;加入荧光标记二抗(1:200-1:500稀释),室温避光孵育30-60分钟
再次冲洗后,用抗淬灭封片液封片,荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察采集图像
4. ELISA(酶联免疫吸附试验)
包被与封闭
用包被缓冲液(如碳酸盐缓冲液pH9.6)稀释抗原至合适浓度,每孔加入100μl,4℃包被过夜
弃去包被液,PBST洗涤3次,每次3分钟;加入封闭液(5% BSA)每孔200μl,37℃孵育1-2小时
抗体孵育
一抗按比例稀释后,每孔加入100μl,37℃孵育1-2小时,或4℃孵育过夜
PBST洗涤3次,加入稀释好的酶标二抗,每孔100μl,37℃孵育1小时
洗涤后加入底物溶液(如TMB)每孔100μl,37℃避光显色10-20分钟,加入终止液(2M H₂SO₄),用酶标仪在450nm波长读取OD值
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