PerCP-Cy5.5标记的S100钙结合蛋白A6重组兔单抗 新品

产品属性

商品介绍

英文别名：Protein S100-A6; Calcyclin; MLN 4; PRA; CACY; CABP; 5B10.

靶蛋白：S100A6（钙结合蛋白家族）

抗体类型：重组兔单克隆抗体

荧光标记：PerCP-Cy5.5（激发 488nm，发射 695nm 远红光，多色流式常用串联染料）

靶蛋白功能

钙信号调控蛋白，参与细胞增殖、凋亡、上皮间质转化、纤维化、肿瘤侵袭转移，在成纤维细胞、上皮细胞、肿瘤细胞高表达。

适用实验

多色流式 FCM、IF、IHC、胞内蛋白共定位

适用物种：人、小鼠、大鼠

原理特点

该重组兔单抗搭配PerCP-Cy5.5串联远红外荧光标记，抗淬灭、低背景、多色适配性极佳，特异性识别S100A6钙结合蛋白。S100A6通过结合钙离子调控细胞增殖、上皮间质转化、纤维化及肿瘤侵袭转移，在肿瘤与纤维化组织中高表达。该抗体特异性强、信号稳定，适合多色流式联合染色、免疫荧光共定位分析，可精准检测组织与细胞中S100A6的表达差异。

靶点背景

1. S100A6 属于钙感应蛋白家族，钙离子结合后构象改变调控下游靶分子

2. 参与细胞增殖、凋亡、细胞骨架重塑、上皮间质转化、应激应答

3. 肿瘤增殖侵袭、纤维化疾病、细胞衰老相关病理研究标志物

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样本处理与实验操作

1. Western Blot（免疫印迹）

样本制备

细胞样本：PBS洗涤2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制剂），冰上裂解30分钟，12000rpm离心15分钟取上清，BCA法定量蛋白浓度

组织样本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，离心后取上清，调整蛋白浓度至一致

变性处理：加入5×SDS上样缓冲液，95℃加热5-10分钟，冷却后上样

抗体孵育

转膜完成后，用5% BSA或牛奶封闭液室温封闭1-2小时

一抗稀释后4℃孵育过夜（12-16小时），或室温孵育1-2小时；孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中

TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟；加入二抗（1:5000-1:10000稀释）室温孵育1-2小时

再次洗涤后，用ECL发光液显影，通过凝胶成像系统采集图像

2. IHC-P（石蜡切片免疫组化）

样本前处理

脱蜡水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分钟）、无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分钟），最后用PBS冲洗

抗原修复：将切片放入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中，微波炉加热至沸腾，保持10-15分钟，自然冷却至室温

封闭处理：3% H₂O₂室温孵育10分钟灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗后用10%山羊血清封闭30分钟

抗体孵育

一抗稀释后滴加在切片上，4℃孵育过夜；孵育时置于湿盒中，防止液体挥发

次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟；加入二抗（生物素标记）室温孵育30分钟

PBS冲洗后，加入ABC复合物室温孵育30分钟，DAB显色剂显色（显微镜下观察控制时间，通常3-10分钟），苏木素复染后脱水封片

3. ICC/IF（细胞免疫荧光）

样本制备

细胞爬片培养至70-80%汇合度，PBS洗涤2次，4%多聚甲醛固定15-20分钟

通透处理（根据抗体类型选择）：0.1% Triton X-100室温孵育10分钟，PBS冲洗3次

封闭处理：5% BSA室温封闭30-60分钟，减少非特异性结合

抗体孵育

一抗稀释后滴加在爬片上，4℃孵育过夜，或室温孵育1-2小时

PBS冲洗3次，每次5分钟；加入荧光标记二抗（1:200-1:500稀释），室温避光孵育30-60分钟

再次冲洗后，用抗淬灭封片液封片，荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察采集图像

4. ELISA（酶联免疫吸附试验）

包被与封闭

用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液pH9.6）稀释抗原至合适浓度，每孔加入100μl，4℃包被过夜

弃去包被液，PBST洗涤3次，每次3分钟；加入封闭液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小时

抗体孵育

一抗按比例稀释后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小时，或4℃孵育过夜

PBST洗涤3次，加入稀释好的酶标二抗，每孔100μl，37℃孵育1小时

洗涤后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光显色10-20分钟，加入终止液（2M H₂SO₄），用酶标仪在450nm波长读取OD值