BF555标记的内皮粘蛋白EMCN抗体
原理特点
本抗体采用BF555橙红色荧光标记，光稳定性强、成像分辨率高，特异性靶向内皮粘蛋白EMCN。EMCN是血管内皮细胞特异性黏附蛋白，参与血管生成、内皮屏障构建、炎症细胞浸润及组织血管重塑，是血管内皮细胞的经典标志物。该抗体特异性识别内皮细胞源性EMCN蛋白，非特异吸附少，适配共聚焦荧光成像、组织血管染色、内皮细胞功能及血管病变相关研究。
英文名称:Endomucin Rabbit pAb, BF555 conjugated
中文名称:BF555标记的内皮粘蛋白EMCN抗体
英文别名：EMCN; EMCN2; Endomucin 2; Endomucin; Endomucin-2; Endothelial sialomucin; Gastric cancer antigen Ga34; MUC-14; MUCEN_HUMAN; Mucin 14; Mucin-14.
靶标：EMCN 内皮粘蛋白，血管内皮特异性表面标志物，标记微血管、新生血管
荧光标记：BF555（对标 AF555/Cy3）；Ex=555 nm，Em=572 nm
抗体类型：兔多克隆为主
种属反应：人、小鼠、大鼠、犬
适用实验：组织免疫荧光、石蜡 / 冰冻切片 IHC、ICC、血管示踪
功能用途：肿瘤新生血管生成、血管发育、内皮细胞鉴定、缺血组织血管重构
储存：-20℃避光，12 个月有效期
靶点背景
1. EMCN 是血管内皮特异性跨膜糖蛋白，高表达于微血管、毛细血管内皮细胞
2. 参与血管生成、内皮细胞黏附、血管稳态维持，区分动静脉内皮亚型
3. 组织微血管密度统计、血管新生、肿瘤血管生成病理检测标志物
样本处理与实验操作
1. Western Blot（免疫印迹）
样本制备
细胞样本：PBS洗涤2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制剂），冰上裂解30分钟，12000rpm离心15分钟取上清，BCA法定量蛋白浓度
组织样本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，离心后取上清，调整蛋白浓度至一致
变性处理：加入5×SDS上样缓冲液，95℃加热5-10分钟，冷却后上样
抗体孵育
转膜完成后，用5% BSA或牛奶封闭液室温封闭1-2小时
一抗稀释后4℃孵育过夜（12-16小时），或室温孵育1-2小时；孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中
TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟；加入二抗（1:5000-1:10000稀释）室温孵育1-2小时
再次洗涤后，用ECL发光液显影，通过凝胶成像系统采集图像
2. IHC-P（石蜡切片免疫组化）
样本前处理
脱蜡水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分钟）、无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分钟），最后用PBS冲洗
抗原修复：将切片放入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中，微波炉加热至沸腾，保持10-15分钟，自然冷却至室温
封闭处理：3% H₂O₂室温孵育10分钟灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗后用10%山羊血清封闭30分钟
抗体孵育
一抗稀释后滴加在切片上，4℃孵育过夜；孵育时置于湿盒中，防止液体挥发
次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟；加入二抗（生物素标记）室温孵育30分钟
PBS冲洗后，加入ABC复合物室温孵育30分钟，DAB显色剂显色（显微镜下观察控制时间，通常3-10分钟），苏木素复染后脱水封片
3. ICC/IF（细胞免疫荧光）
样本制备
细胞爬片培养至70-80%汇合度，PBS洗涤2次，4%多聚甲醛固定15-20分钟
通透处理（根据抗体类型选择）：0.1% Triton X-100室温孵育10分钟，PBS冲洗3次
封闭处理：5% BSA室温封闭30-60分钟，减少非特异性结合
抗体孵育
一抗稀释后滴加在爬片上，4℃孵育过夜，或室温孵育1-2小时
PBS冲洗3次，每次5分钟；加入荧光标记二抗（1:200-1:500稀释），室温避光孵育30-60分钟
再次冲洗后，用抗淬灭封片液封片，荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察采集图像
4. ELISA（酶联免疫吸附试验）
包被与封闭
用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液pH9.6）稀释抗原至合适浓度，每孔加入100μl，4℃包被过夜
弃去包被液，PBST洗涤3次，每次3分钟；加入封闭液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小时
抗体孵育
一抗按比例稀释后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小时，或4℃孵育过夜
PBST洗涤3次，加入稀释好的酶标二抗，每孔100μl，37℃孵育1小时
洗涤后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光显色10-20分钟，加入终止液（2M H₂SO₄），用酶标仪在450nm波长读取OD值
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