BF647标记的HA tag标签抗体
原理特点
本抗体为HA标签特异性抗体，搭配BF647稳定远红外荧光标记，可特异性识别外源表达蛋白中的HA标签序列，不结合细胞内源性蛋白。HA标签是融合蛋白表达、蛋白纯化、蛋白定位的经典标签，该抗体特异性强、背景极低，荧光信号稳定，可快速检测HA融合蛋白的表达、定位与表达量，适配多色免疫荧光共染、流式检测、组织样本定位实验，适用于分子克隆与蛋白功能验证研究。
英文名称:HA tag Rabbit pAb, BF647 conjugated
中文名称:BF647标记的HA tag标签抗体
英文别名：HA-tag; HA epitope tag; HA1; HA2; hemagglutinin; Hemagglutinin HA1 chain; Hemagglutinin HA2.
靶标：HA 标签（氨基酸序列 YPYDVPDYA，流感血凝素短肽标签）
荧光标记：BF647；Ex=647 nm，Em=666 nm
抗体类型：小鼠单克隆（4D1 经典克隆）
种属反应：无物种限制，仅识别外源 HA 融合标签蛋白
适用实验：IF、流式、WB、IP 验证外源蛋白表达
功能用途：质粒过表达蛋白检测、蛋白互作、亚细胞定位示踪
储存：-20℃避光保存
靶点背景
1. HA 标签（YPYDVPDYA）是外源蛋白常用短肽标签，融合在目的蛋白末端
2. 不影响靶蛋白天然构象，用于外源过表达蛋白特异性识别富集
3. 免疫荧光、WB、Co-IP 检测外源转染蛋白表达与互作
核心实验操作方法
1. Western Blot（WB）
抗体孵育
一抗孵育：用5%脱脂牛奶或BSA稀释抗体至推荐浓度（如1:1000），4℃摇床缓慢孵育过夜；或室温孵育1-2小时，孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中。
洗涤：用TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟，洗去未结合的一抗；加入HRP标记二抗（1:5000-1:10000稀释），室温孵育1小时。
显影：再次洗涤后，加入ECL发光液孵育1-2分钟，用化学发光成像仪采集图像，根据信号强度调整曝光时间。
2. 免疫组化（IHC）
抗体孵育
一抗孵育：滴加稀释后的一抗（如1:200）于组织切片上，置于湿盒中4℃孵育过夜；次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入生物素标记二抗（1:200）室温孵育30分钟，PBS冲洗后加入ABC复合物（1:100）室温孵育30分钟。
显色封片：DAB显色剂显色3-10分钟（显微镜下观察控制时间），苏木素复染1分钟，梯度乙醇脱水后中性树胶封片。
3. 免疫荧光（IF）
抗体孵育
一抗孵育：用5% BSA稀释抗体至工作浓度（如1:100），滴加在细胞爬片上，4℃避光孵育过夜；室温复温后PBS冲洗3次，每次5分钟。
二抗结合：加入荧光标记二抗（如FITC标记抗兔IgG，1:200），室温避光孵育30-60分钟；PBS冲洗后用抗淬灭封片液封片。
观察：荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察，激发波长根据二抗标记物选择（如FITC为488nm）。
4. ELISA实验
包被与孵育
包被：用包被缓冲液（pH9.6碳酸盐缓冲液）稀释抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃过夜孵育。
封闭与一抗孵育：弃去包被液，PBST洗涤3次，加入5% BSA封闭液200μl/孔，37℃孵育1小时；加入稀释后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。
检测：洗涤后加入酶标二抗（1:5000），37℃孵育1小时；TMB底物溶液显色10-30分钟，2M硫酸终止反应后，酶标仪450nm波长读取OD值。
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