FITC标记的聚组氨酸抗体标签单克隆抗体
原理特点
该单克隆抗体经FITC荧光标记，特异性识别6×His聚组氨酸标签，该标签广泛用于原核、真核重组蛋白表达与纯化。抗体可特异性结合变性与天然状态的His标签蛋白，不与宿主内源蛋白发生交叉反应，荧光标记均一、背景低，适配免疫荧光定位、流式检测、Dot blot及细胞内重组蛋白表达验证实验，操作简便、适用性广。
英文名称:His tag Mouse mAb, FITC conjugated
中文名称:FITC标记的聚组氨酸抗体标签单克隆抗体
英文别名：HisX6; 6His; His-Tag; 6 His epitope tag; Hexa His tag; HHHHHH epitope tag; HHHHHH tag; Histidine.
靶标：6×His（多聚组氨酸标签，蛋白纯化常用标签）
荧光基团：FITC（异硫氰酸荧光素）；Ex≈490 nm，Em≈520 nm
抗体类型：小鼠单克隆 IgG1
用途：WB、IF、流式、ELISA，检测原核 / 真核 His 融合蛋白
稀释参考：WB 1:1000–1:5000；流式 1 μg/mL
储存：-20℃避光，避免反复冻融
靶点背景
1. His 标签（6×His）由连续组氨酸构成，可螯合镍离子用于蛋白纯化
2. 原核表达蛋白最常用标签，分子量小，几乎不影响蛋白折叠与功能
3. 原核表达鉴定、蛋白纯化鉴定、免疫荧光检测重组蛋白表达
实验操作关键
样本前处理
细胞样本：用PBS缓冲液轻洗2-3次去除培养基残留，固定（如4%多聚甲醛）后按需进行通透处理（0.3% Triton X-100），封闭液（5% BSA或血清）孵育30-60分钟以降低非特异性结合。
组织样本：石蜡切片需先脱蜡水化，根据抗体类型选择合适的抗原修复方法（如柠檬酸盐缓冲液热修复）；新鲜组织需尽快固定或冷冻保存。
抗体孵育
一抗孵育：通常4℃过夜孵育（12-16小时），或室温孵育1-2小时；孵育时需保证样本完全被抗体覆盖，可放置于湿盒中防止液体挥发。
二抗结合：选择与一抗种属匹配的二抗，室温避光孵育30-60分钟；洗板/洗片需充分，通常用PBS或TBST清洗3-5次，每次5分钟，去除未结合的二抗。
结果检测
荧光检测：荧光标记抗体需避光操作，封片时使用抗淬灭剂，染色后1小时内完成观察，或4℃避光保存不超过4小时。
显色反应：酶标抗体需严格控制底物孵育时间，避免显色过度或不足；终止反应后及时读取数据，部分显色产物易褪色需尽快分析。
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