半胱氨酸(Cys)含量测试盒
产品介绍:
蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中,Cys是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
测定原理:
Cys还原磷钨酸生成钨蓝,在600nm处有吸收峰;通过600nm吸光度,计算Cys含量。
自备仪器和用品:
低温离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、磷酸和蒸馏水。
产品名称 | 半胱氨酸(Cys)含量测试盒 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 |
检测方法 | 微量法、可见分光光度法 |
分类 | 氨基酸代谢系列 |
货号 | YSH3255 |
检测原理:
巯基特异性显色反应:半胱氨酸分子含有游离‑SH 巯基,可与二硫键显色试剂(DTNB,Ellman 试剂)反应。
产物生成黄色 TNB⁻离子:DTNB 与巯基反应生成 2‑硝基‑5‑硫代苯甲酸根(TNB‑),水溶液呈亮黄色。
可见光比色读数:TNB‑在 412 nm 有最大吸收峰,吸光度与样本中游离半胱氨酸含量正相关。
标准曲线定量:半胱氨酸标准梯度制作曲线,扣除空白吸光度,换算样本 Cys 浓度。
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操作步骤:
操作仪器预热:将可见分光光度计预热30min,调节波长至540nm,用蒸馏水调零标准曲线绘制:
取6支具塞刻度试管,分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液(10mg/mL)
用蒸馏水补至1.0mL,再加入2.0mL显色工作液,沸水浴5min
立即用流水冷却至室温,定容至25mL,摇匀后测定540nm处吸光值
以葡萄糖浓度(mg/mL)为横坐标,吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定:
试剂名称(μL) 空白管 测定管
提取液/样本 100 100
试剂一 700 700
试剂二 100 100
混匀后37℃水浴30min,立即加入2.0mL显色工作液,沸水浴5min
流水冷却至室温,定容至25mL,摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定
关键字: 半胱氨酸;Cys;含量测试盒;
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