考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒
产品介绍：
测定原理
在酸性溶液中，考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物在620nm处有最大吸收峰， 其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析。
产品名称 | 考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 |
检测方法 | 微量法、可见分光光度法 |
分类 | 蛋白含量测定系列 |
货号 | YSH3343 |
检测原理：
染料形态转变：游离考马斯亮蓝 G‑250 在酸性溶液中呈红色，最大吸收 465 nm。
蛋白‑染料结合：染料与蛋白质疏水氨基酸残基结合，染料构象改变变为蓝色，最大吸收偏移至 595 nm。
吸光度‑浓度正相关：在一定蛋白浓度范围内，蓝色复合物吸光度值和蛋白含量呈线性关系。
标准曲线定量：BSA 标准梯度建立曲线，空白扣除后换算样本蛋白浓度。
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操作步骤：
比色法/分光光度法/微量法操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到500nm/550nm，蒸馏水调零试剂配制：
试剂二：临用前加入1.5mL蒸馏水充分溶解备用
试剂三：临用前加入1.5mL蒸馏水充分溶解备用样本测定：
试剂名称(μL) 空白管 测定管
蒸馏水/样本 100 100
试剂一 700 700
试剂二 100 100
试剂三 100 100
混匀后37℃水浴10min，记录500nm/550nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将PLD标准品稀释成0、1、2、3、4、5U/L系列浓度，同样处理，测定500nm/550nm处的吸光值，绘制标准曲线
ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃
设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度
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