商品属性:
产品名称 | 水土中亚硝酸盐含量测试盒 | 货号 | YSH3398 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 检测方法 | 微量法、可见分光光度法 |
商品介绍:
亚硝酸盐广泛存在于水体和土壤中,不仅是有机氮分解的重要中间产物,也可能来自污染。人体摄入过量后,可诱发消化系统癌变。
测定原理:
在酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物,再与N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物,在540nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
检测原理:
样本前处理净化:水样 / 土壤浸出液过滤去除悬浮泥沙、有机质杂质干扰。
酸性重氮化:酸性环境中亚硝酸根与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物。
偶联生成有色复合物:重氮盐与 N‑1‑萘乙二胺二盐酸盐偶联,形成紫红色染料。
比色定量计算:540nm 测吸光度,标准曲线求出水土样品亚硝酸盐浓度。
样本前处理方法:
血清/血浆样本
血清制备:室温自然凝固15-20分钟,2000-3000转/分离心20分钟,取上清液。
血浆制备:使用EDTA或肝素钠抗凝,采血后轻轻颠倒混匀,同上述条件离心取上清。
保存:4℃可保存3天,-20℃可保存1个月,避免反复冻融。
组织样本
称取约0.1g组织,按1:9比例加入预冷的提取液(如0.1g组织+0.9mL提取液),冰浴匀浆。
10000转/分4℃离心10分钟,取上清液待测,剩余样本-20℃保存。
细胞样本
收集细胞沉淀,加入提取液(10^6个细胞/1mL提取液),吹打混匀后超声破碎(冰浴,功率20%,超声3s/间隔10s,重复30次)。
10000转/分4℃离心10分钟,取上清液待测。
尿液样本
取新鲜尿液,2000转/分离心10分钟,取上清液。
若尿液浑浊,需用0.22μm滤膜过滤后再检测。
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测定操作步骤:
比色法/COD-PAP法/分光光度法操作仪器预热:分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到500~520nm,蒸馏水调零试剂配制:
试剂二:临用前加入10mL蒸馏水充分溶解备用
试剂三:临用前加入20mL蒸馏水充分溶解备用样本测定:
试剂名称(μL) 空白管 测定管
蒸馏水/样本 100 100
试剂一 700 700
试剂二 100 100
试剂三 100 100
混匀后37℃水浴15min,记录500~520nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制:将FC标准品稀释成0、0.031、0.063、0.125、0.25、0.5、1μmol/L系列浓度,同样处理,测定500~520nm处的吸光值,绘制标准曲线
ELISA法操作试剂准备:将试剂盒从冷藏环境中取出,室温平衡15-30分钟;将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样:
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃
设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加温育:除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)显色:每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min终止:每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算:绘制标准曲线,按曲线方程计算样本浓度
关键字: 水土中亚硝酸盐含量;测试盒;
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