大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA试剂盒

采用双抗体夹心酶联免疫吸附原理，预先将抗大鼠 15-LO 特异性捕获抗体包被于酶标板，样本中 15-LO 蛋白与固相抗体结合，再加入酶标记检测抗体形成固相抗体 - 靶蛋白 - 酶标抗体夹心复合物，洗板去除未结合物质后加入显色底物，酶促显色产物吸光度与样本内 15-LO 含量正相关，通过标准品拟合标准曲线即可定量样本中 15 脂加氧酶浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度可达0.1ng/mL，精准捕捉微量样本指标变化

检测范围：0.2ng/mL - 8ng/mL

反应时间：总反应时长90分钟，包含样本孵育60分钟、二抗孵育30分钟

保存条件：试剂盒未开封2-8℃冷藏保存，严禁冷冻；开封后试剂密封避光2-8℃存放

有效期：未开封原装试剂盒有效期6个月

显色系统：TMB单组分显色液，底物显色稳定，无自发显色干扰

检测波长：450nm（主波长）、630nm（参比波长）

标准曲线绘制：采用梯度稀释标准品（6个浓度梯度），以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制四参数拟合标准曲线，拟合度R²≥0.995

特异性：仅特异性识别大鼠15-LO/LOX指标，与大鼠其他脂氧合酶、同源蛋白无交叉反应

重复性：板内变异系数CV≤6%，板间变异系数CV≤8%，检测稳定性优异

注意事项：样本需新鲜分离、低温离心处理，避免反复冻融；显色反应需严格避光，终止后15分钟内完成上机检测；试剂使用前需平衡至室温，严禁混用不同批次试剂
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒全部组分室温静置 25min，20× 浓缩洗涤液以蒸馏水 1:20 稀释备用，酶标板恢复至室温。

标准品稀释：取出冻干 15-LO 标准品，加入配套标准品稀释液充分溶解，梯度配制 6 组浓度标准品，设置空白对照孔，所有标准品现配现用。

加样孵育：标准孔、待测样本孔各加 50μL 对应液体，每孔同步加入 50μL HRP 标记抗大鼠 15-LO 抗体，封板膜密封，37℃避光孵育 60min。

洗板操作：倒掉孔内液体，每孔加满稀释后洗涤液浸泡 30s，吸水纸彻底拍干残留液体，重复洗板 5 次。

底物显色：每孔依次添加 TMB 底物 A 液、B 液各 50μL，避光环境 37℃孵育 15min，观察孔内蓝色梯度区分。

终止读数：每孔加入 50μL 终止液震荡混匀，10min 内酶标仪 450nm 主波长读取各孔 OD 吸光值。

数据计算：以标准品浓度为横轴、对应 OD 值为纵轴拟合标准曲线，代入样本 OD 值换算组织 / 血清中 15-LO 蛋白浓度。