大鼠17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒

竞争法 ELISA 检测原理，酶标板包被 17-OHCS 抗原，待测样本中大鼠 17 羟皮质类固醇与固相抗原竞争结合有限量酶标记特异性抗体，样本靶标含量越高，结合固相的酶标抗体越少；终止显色后读取 OD 值，对照标准曲线换算样本中 17-OHCS 含量，适用于体液类固醇微量定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测值0.5nmol/L，可精准检测低浓度体液样本中17-OHCS含量

检测范围：1nmol/L - 100nmol/L

反应时间：总反应时长100分钟，样本孵育65分钟，酶标二抗孵育35分钟

保存条件：全套试剂2-8℃避光冷藏，浓缩洗涤液室温密封保存，禁止冷冻

有效期：原装未拆封有效期6个月

显色系统：TMB双组分显色体系，显色梯度均匀，底色干净

检测波长：450nm主波长检测，620nm参比校正

标准曲线绘制：设置7个标准浓度梯度，四参数Logistic拟合曲线，R²≥0.994，适配微量体液样本检测

特异性：特异性结合大鼠17羟皮质类固醇，与皮质醇、醛固酮等类固醇物质无交叉反应

重复性：板内CV≤5.5%，板间CV≤7.5%，重复性误差符合科研检测标准

注意事项：尿液、血清样本需预处理去除杂质，避免溶血、脂血样本；孵育过程严格控温37℃，温度波动不超过±1℃；洗涤步骤需充分，避免非特异性吸附影响结果
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

公司正在出售的产品：

实验操作流程：

试剂平衡：所有试剂盒试剂室温放置 30min，浓缩洗涤液按 1:20 比例纯水稀释，去除酶标板铝箔袋平衡温度。

标准品稀释：17-OHCS 冻干标准品用专用稀释液复溶，梯度稀释制备 7 个浓度梯度，预留空白孔无抗原添加。

加样孵育：各孔添加 50μL 标准品或预处理样本，再加 50μL 酶结合工作液，封膜避光 37℃恒温孵育 65min。

洗板操作：弃去孔内反应液，洗涤液加满每孔静置 35s，拍干液体，连续洗板 6 次降低非特异性结合。

底物显色：每孔加入等量显色底物 A、B 液各 50μL，避光 37℃孵育 18min，避免强光直射造成底物失效。

终止读数：快速加入终止液 50μL 混匀，5-10min 内使用酶标仪测定 450nm 吸光度，记录数值。

数据计算：根据标准品 OD 值建立四参数拟合标准曲线，计算样本上清中 17-OHCS 类固醇含量。