大鼠高铁血红蛋白(MHB)ELISA试剂盒

本试剂盒基于酶联免疫夹心检测原理，固相载体包被大鼠MHB特异性抗体，待测大鼠血清、组织等样本中的MHB抗原可特异性吸附于微孔内，结合酶标记特异性抗体后形成稳定夹心复合物，经显色、终止步骤后测定吸光度，依据标准曲线回归方程，定量检测大鼠样本中高铁血红蛋白的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.5μmol/L

检测范围：1μmol/L - 50μmol/L

反应时间：总反应时长80分钟（样本温育40分钟、显色40分钟）

保存条件：试剂盒2-8℃冷藏，显色液、终止液避光单独存放

有效期：未开封有效期8个月，开封后2个月内使用完毕

显色系统：特异性底物显色体系，基于血红蛋白氧化还原显色反应

检测波长：405nm

标准曲线绘制：线性拟合标准曲线，浓度与OD值线性相关性良好，R²≥0.992

特异性：专一检测大鼠高铁血红蛋白，对氧合血红蛋白、还原血红蛋白无响应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：血液样本需避光采集、快速检测，避免血红蛋白氧化；样本无溶血、凝血块，否则影响检测结果
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒组分室温放置 28min，稀释 MHB 标准品设置梯度浓度，标记酶标板空白、标准、大鼠全血样本孔。

直接向各孔添加对应标准品、稀释后大鼠血液样本各 100μL，空白孔加入等量样本稀释液。

封板封口，37℃孵箱孵育 55min，让 MHB 抗原与板底包被抗体稳定结合。

倒掉孔内液体，洗涤液注满每孔静置 20s，甩干重复洗板 4 次，拍干多余洗液。

非空白孔加入酶联检测抗体 100μL，封板避光，37℃孵育 28min。

依次添加显色 A、B 液各 50μL，轻震混匀，避光 37℃显色 14min。

加入终止液终止反应，10min 内 450nm 测 OD 值，对照标准曲线得出样本 MHB 含量。