大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附原理，预先在酶标板包被大鼠BMP-2特异性抗体，待测大鼠样本中的BMP-2抗原与抗体特异性结合，加入辣根过氧化物酶标记抗体形成免疫复合物，经显色、终止反应后检测吸光度，依据标准曲线计算样本中骨成型蛋白2的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤8pg/mL

检测范围：15pg/mL - 600pg/mL

反应时间：总反应时长150分钟（样本温育90分钟、酶温育30分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光冷藏，严禁冷冻，试剂开封后密封防潮

有效期：未开封有效期8个月，开封后1.5个月内用完

显色系统：HRP催化TMB显色体系

检测波长：450nm

标准曲线绘制：四参数拟合标准曲线，R²≥0.993

特异性：特异性识别大鼠BMP-2，与BMP-4、BMP-7无交叉反应

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%

注意事项：骨组织匀浆样本需去除骨渣杂质；全程避免高温，防止蛋白变性
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温回温 38min，复溶 BMP-2 标准品配制 6 组梯度浓度，标记酶标板各功能孔位。

一步上样：标准孔加梯度标准品 100μL，待测孔加入大鼠骨髓匀浆上清 100μL，空白孔添加稀释液。

封板密闭，37℃恒温孵育 82min，让 BMP-2 抗原牢固结合固相捕获抗体。

倾倒废液，洗涤液浸润每孔 42s 后甩干，洗板 6 次，去除非特异性吸附杂质。

检测孔加入酶标记抗体工作液 100μL，避光封板，37℃孵育 38min。

滴加显色 A、B 液各 50μL，混匀避光，37℃显色 17min。

加入终止液终止酶促反应，酶标仪 450nm 读值，绘制曲线计算 BMP-2 浓度。