本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理,预先将大鼠sICAM-1捕获抗体包被于酶标板微孔,待测样本中的sICAM-1抗原可与固相抗体特异性结合,洗涤去除游离杂质后,加入HRP标记检测抗体形成免疫夹心复合物,底物显色终止后测定吸光度,吸光度数值与样本sICAM-1含量正相关,通过标准曲线完成定量检测。
基本参数:

产品名称:大鼠可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒
英文名称:sICAM-1 ELISA Kit
货号:Y-E1442
规格:48T/96T
灵敏度:最低检测浓度小于0.9 pg/mL
检测范围:3 pg/mL - 100 pg/mL
反应时间:全程110分钟(样本孵育50min、酶标孵育30min、显色30min)
保存条件:2-8℃密封避光干燥保存,禁止冷冻
有效期:12个月
显色系统:高灵敏TMB双组份显色液,快速显色、稳定性强
检测波长:450nm
标准曲线绘制:六梯度标准浓度拟合,R²≥0.992
特异性:特异性结合大鼠sICAM-1,与VCAM-1、PECAM-1等粘附分子无交叉反应
重复性:板内CV<7%,板间CV<9%
注意事项:溶血、黄疸样本会干扰检测结果,需舍弃;孵育过程保持湿润,防止孔壁干孔;洗板彻底,降低非特异性吸附。
试剂盒组成:

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原,结合目标物
标准品 6支/套 制备标准曲线,定量检测依据
生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物,提供酶结合位点
辣根过氧化物酶(HRP)标记亲和素 1瓶 与生物素结合,催化底物显色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物,产生颜色变化
终止液 1瓶 终止酶促反应,稳定显色结果
浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板,去除未结合物质
封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发
实验步骤如下:

试剂盒室温平衡 31min,稀释浓缩洗涤缓冲液备用。
分孔排布加样,空白孔无待测物加入,梯度标准品、质控、待测样本稀释后上样并添加酶结合液。
封板后 37℃孵育 66min。
洗板 5 次,浸泡 32s 每次,吸干微孔内残留液体。
底物避光 37℃显色 16min。
终止液滴入混匀终止整体反应。
酶标仪 450nm 测吸光度,绘制曲线计算 sICAM-1 数值。
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