本试剂盒依托双抗体夹心ELISA技术原理，以包被在酶标板上的大鼠AMPK特异性抗体为固相载体，结合样本及标准品中的AMPK抗原，再加入酶标记二抗形成稳定的免疫复合物，洗涤去除非特异性结合物后，底物在酶的催化下发生显色反应，终止显色后测定吸光度，根据标准曲线的线性关系，精准定量大鼠样本中磷酸化AMPK的含量。
基本参数：
产品名称：大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA试剂盒
英文名称：AMPK ELISA Kit
货号：Y-E1057
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度≤0.1ng/mL
检测范围：0.3ng/mL - 10ng/mL
反应时间：总反应时长140min，分步温育、洗涤、显色
保存条件：试剂盒2-8℃保存，浓缩试剂使用前平衡至室温，剩余试剂密封避光
有效期：未开封有效期6个月
显色系统：TMB-H2O2显色系统，硫酸溶液终止显色
检测波长：450nm波长检测
标准曲线绘制：标准品梯度稀释，测定吸光度，四参数拟合曲线，用于样本定量分析
特异性：特异性识别大鼠磷酸化AMPK，与非磷酸化AMPK及同源激酶无交叉反应
重复性：板内CV＜7.5%，板间CV＜9.5%
注意事项：样本需低温离心处理，避免蛋白降解；所有试剂避免反复冻融；实验耗材无酶无污染，保证检测准确性
关键注意事项：
实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书，不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存，未用完的试剂需密封后放回规定温度（通常2-8℃或-20℃）
避免试剂污染，不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖，防止出现假阳性结果
显色过程需避光，避免阳光直射影响结果
实验步骤如下：
预包被板各孔添加标准品梯度液 50μL，待测血清样本 50μL，空白孔仅加稀释液，做好孔位标记。
每孔加入酶标记二抗工作液 100μL，覆膜封口，37℃恒温孵育 60min。
倾倒孔内废液，每孔灌满洗涤液静置 35s，用力拍板吸干，重复洗板 4 次。
避光添加显色底物 A、B 液各 50μL，混匀后室温暗处显色 20min。
每孔加入终止溶液 50μL，终止显色，水平摇晃微孔板使液体混合均匀。
酶标仪选择 450nm 波长检测吸光值，录入所有孔位读数。
根据标准曲线计算样本 AMPK 磷酸化蛋白浓度，实验数据剔除明显异常离群值。
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