本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板包被大鼠CA125特异性单克隆抗体，待测大鼠样本及标准品中的CA125抗原与固相抗体特异性结合，加入酶标记二抗形成免疫复合物，催化底物显色，颜色深浅对应CA125含量高低，通过酶标仪读数及标准曲线换算，实现CA125的定量检测。
基本参数：
产品名称：大鼠卵巢癌标志物CA125ELISA试剂盒
英文名称：ovarian cancer marker-CA125 ELISA Kit
货号：Y-E1357
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度≤0.5U/mL
检测范围：2U/mL - 100U/mL
反应时间：总反应时长150min
保存条件：2-8℃避光密封保存，标准品开封后一次性使用，避免失效
有效期：未开封有效期6个月
显色系统：高灵敏度TMB免疫显色体系
检测波长：450nm波长检测
标准曲线绘制：梯度CA125标准品检测，拟合标准曲线，精准定量血清样本含量
特异性：特异性识别大鼠CA125抗原，与其他肿瘤标志物无交叉反应
重复性：板内CV＜8%，板间CV＜10%
注意事项：血清样本无溶血、脂血，避免干扰标志物检测；样本稀释精准，严格遵循说明书比例；温育温度恒定，保证免疫结合效率
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
微孔板每孔加入梯度标准品 50μL，大鼠腹腔积液 / 血清样本 50μL，设置空白对照孔。
每孔加入酶标二抗工作液 103μL，封板封口，37℃孵育 66min。
弃液后洗涤液注满微孔静置 29s，拍干，循环洗板 5 次。
避光加入显色底物 A、B 各 50μL，混匀，室温避光显色 16min。
每孔添加终止液 50μL 终止显色，混匀微孔板。
酶标仪 450nm 读取各孔 OD 值，记录全部检测数据。
绘制标准曲线计算 CA125 浓度，高于曲线上限样本做梯度稀释检测。
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