大鼠免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，将大鼠IgM特异性抗体包被于酶标板，加入标准品和待测大鼠样本，样本内IgM抗原与固相抗体特异性结合，洗涤后加入酶标记二抗构建夹心结构，底物显色后检测吸光度，依据标准曲线精准测定大鼠样本中IgM的浓度。
基本参数‌：

产品名称：大鼠免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒

英文名称：IgM ELISA Kit
货号：Y-E1447

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度≤0.2μg/mL

检测范围：0.6μg/mL - 25μg/mL

反应时间：总反应时长120min

保存条件：2-8℃避光密封保存，避免试剂挥发、污染

有效期：未开封有效期6个月

显色系统：TMB酶促显色，酸性终止液终止

检测波长：450nm波长检测

标准曲线绘制：5梯度标准品拟合曲线，满足定量检测要求

特异性：特异性结合大鼠IgM，无其他免疫球蛋白交叉反应

重复性：板内CV＜8%，板间CV＜10%

注意事项：急性期血清样本及时检测，防止IgM降解；操作规范，避免孔间交叉污染；显色时间统一
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

微孔板每孔加入梯度稀释标准品 54μL，待测生物样本 54μL，做好孔组区分。

加入酶标记二抗工作液 96μL，封板封口，37℃恒温孵育 57min。

弃去孔内液体，洗涤液浸泡 30s，倒扣拍干，连续洗板 5 次。

避光添加显色 AB 液各 50μL，混匀后避光显色 16min。

每孔加入终止液 50μL 终止显色，充分混匀。

板底清洁后酶标仪 450nm 读取 OD 吸光值。

根据标准曲线方程计算 IgM 含量，平行样本取平均结果。
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