大鼠角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶免疫检测技术，酶标板固相包被大鼠KAF/AR特异性捕获抗体，能够特异性捕获样本中的角化细胞内分泌因子（双调蛋白）抗原。孵育结合充分后洗板，去除未结合杂质，加入HRP标记的检测抗体形成免疫复合物，底物显色后终止反应。检测吸光度并对照标准曲线，可精准定量大鼠样本中KAF/AR的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测下限0.1pg/mL，可精准识别样本中微量KAF/AR蛋白，检测灵敏度稳定。

检测范围：0.2pg/mL - 15pg/mL，适用于大鼠皮肤组织、血清、上皮细胞上清样本检测。

反应时间：全流程90分钟，样本与抗体结合温育60分钟，底物显色15分钟，终止反应5分钟内完成读数。

保存条件：2-8℃避光冷藏保存，禁止冷冻；标准品冻干粉密封干燥保存，溶解后短期低温存放。

有效期：未开封试剂盒有效期6个月，溶解后的标准品需24小时内使用，不可留存复用。

显色系统：经典TMB-HRP显色系统，显色均匀，颜色梯度分明，无杂色干扰。

检测波长：450nm单一波长检测，适配常规实验室酶标仪设备。

标准曲线绘制：采用梯度标准品浓度与对应吸光度值拟合，四参数Logistic曲线，R²≥0.990。

特异性：特异性结合大鼠KAF/AR，与EGF、TGF-α等同家族生长因子无明显交叉反应。

重复性：板内变异系数≤8%，板间变异系数≤10%，实验重复性符合科研检测标准。

注意事项：皮肤样本需去除角质杂质，保证上清纯净；实验过程避免孔板污染、气泡产生；所有耗材需无酶无菌，防止蛋白降解。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温平衡 31min，稀释浓缩洗涤液，溶解 AR/KAF 标准品做梯度稀释，固定酶标板条数。

标品孔加梯度浓度标准品 50μL，样本孔上样待测样本 50μL，空白孔加样本稀释液。

每孔添加酶标记结合液 100μL，封板膜封闭，37℃孵育 66min。

洗板 5 次，洗液浸泡 31s 每次，彻底弃液拍干微孔。

避光加入显色 A、B 液各 50μL，37℃避光显色 16min。

滴加终止液 50μL，轻晃混匀终止显色。

450nm 波长读数，标准曲线定量 KAF/AR 含量。