本试剂盒采用竞争抑制ELISA检测原理,微孔板预先包被3-硝基酪氨酸人工抗原,检测体系中加入标准品、待测样本和定量的3-NT特异性抗体,样本中的3-NT抗原与板上固相抗原竞争结合有限的抗体结合位点,孵育反应后洗涤去除未结合反应物,加入酶标记二抗进行结合反应,再次洗涤后加入TMB底物显色,样本中3-NT含量越高,竞争结合的抗体越多,板上结合的抗体越少,显色越浅,即吸光度值与3-NT浓度呈负相关,通过标准曲线拟合即可定量检测样本中3-硝基酪氨酸的含量。
基本参数:

产品名称:人3-硝基酪氨酸(3-NT)ELISA试剂盒
英文名称:3-NT Elisa Kit
货号:Y-E764
规格:48T/96T
灵敏度:最低检测灵敏度0.1nmol/L,精准检测氧化应激微量标志物
检测范围:0.3nmol/L - 9nmol/L,适配氧化损伤相关样本检测
反应时间:完整反应时长90分钟,快速完成样本检测,适配批量实验
保存条件:试剂盒整体2-8℃避光冷藏,严禁冷冻,防止小分子标志物试剂失效
有效期:原装有效期6个月,开封后1个月内用完,避免试剂氧化失效
特异性:特异性结合3-硝基酪氨酸,与酪氨酸、硝基化其他氨基酸无交叉反应
重复性:板内CV≤7%,板间CV≤9.5%,检测数据波动小
注意事项:样本采集后需快速低温保存,避免体外氧化生成干扰物质;实验全程避光操作,洗板彻底,保证检测准确性
试剂盒组成:

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原,结合目标物
标准品 6支/套 制备标准曲线,定量检测依据
生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物,提供酶结合位点
辣根过氧化物酶(HRP)标记亲和素 1瓶 与生物素结合,催化底物显色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物,产生颜色变化
终止液 1瓶 终止酶促反应,稳定显色结果
浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板,去除未结合物质
封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发
实验步骤如下:

样本处理:血浆样本室温融化,溶血样本舍弃不用,常规样本直接稀释 1:4 备用;标准品复溶后逐级稀释 6 个浓度梯度。
加样布设:空白孔加稀释液 50μL,各标准孔加入对应浓度标准品 50μL,样本孔加入稀释后待测样品 50μL。
一步共加酶试剂:全部反应孔加入酶标记竞争抗原工作液 100μL,封板封口,摇匀板面。
孵育结合:37℃避光孵育 65min,完成竞争免疫结合反应。
洗板操作:倾倒废液,洗涤液浸泡每孔 30s,洗板 4 次,吸水纸吸干孔内水分。
底物显色:加入显色混合液 100μL,37℃避光显色 14min。
终止检测:终止液终止反应,450nm 波长测定吸光度,换算样本 3-NT 含量。
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