大鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/AgBⅢ/H-1Ⅲ)ELISA试剂盒

本试剂盒运用经典双抗体夹心ELISA原理，酶标板微孔内包被纯化的大鼠MHCⅢ特异性捕获抗体。孵育反应过程中，待测样本、梯度标准品中的MHCⅢ抗原与固相抗体特异性结合，洗板清除未结合蛋白与杂质后，加入酶标记的MHCⅢ检测抗体，形成稳定免疫夹心结构。经TMB底物显色、终止液终止反应后，吸光度数值与样本中MHCⅢ含量呈正比，通过标准曲线计算可精准定量其浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤1.5ng/mL

检测范围：3ng/mL - 200ng/mL

反应时间：总反应130分钟（孵育70min、酶反应30min、显色30min）

保存条件：2-8℃避光冷藏，试剂分类密封保存

有效期：12个月

检测波长：450nm/630nm双波长校正

标准曲线绘制：梯度标准品OD值拟合曲线，R²≥0.990

注意事项：样本浓度过高需提前稀释，防止超出检测线性范围
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

1. 试剂室温放置 31min，稀释浓缩洗涤缓冲液，血清样本常温解冻后短暂离心，划分酶标板空白、标准、样品孔。

2. 标准品孔加入系列浓度 MHCⅢ 标准品 50μL，样本孔上样 50μL 待测血清，空白孔添加稀释液。

3. 每孔加入酶标记抗体液 100μL，封板封口，震荡混匀 15s，37℃孵育 57min。

4. 弃净孔内液体，洗板 6 次，单次浸泡 30s，彻底拍干微孔残留液体。

5. 避光依次加入显色 A、B 液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 18min。

6. 加入终止液 50μL 终止显色，充分摇晃混匀。

7. 450nm 测定 OD 值，计算 MHCⅢ 样本浓度。