人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA技术原理，微孔板包被纯化的人Ⅳ型胶原特异性抗体，加入标准品和待测样本，样本中的Col Ⅳ抗原与固相抗体特异性结合，孵育后洗涤除去游离反应物，加入酶标记检测抗体形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，再次洗涤后加入底物显色液进行酶促反应，显色深浅与样本中Col Ⅳ含量成正比，通过酶标仪测定吸光度，结合标准曲线完成定量检测。
基本参数‌：

产品名称：人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒

英文名称：Col Ⅳ   Elisa Kit
货号：Y-E383

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测0.2ng/mL，适配基底膜胶原蛋白检测

检测范围：0.5ng/mL - 115ng/mL，适配肾病、纤维化相关样本检测

反应时间：全程反应时长110分钟，检测流程稳定可靠

保存条件：2-8℃避光冷藏保存，所有试剂密封存放

有效期：原装有效期12个月，开封后30天内使用完毕

特异性：特异性识别人Ⅳ型胶原，与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原无交叉反应

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%，批量检测误差小

注意事项：血清、组织样本预处理除杂；洗板彻底，避免非特异性吸附影响数据
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

样本处理：血清、腹水样本低速离心取上清，轻微稀释待测样本；标准品复溶倍比稀释 5 个浓度梯度。

加样布设：空白孔添加稀释液 50μL，标准品孔、待测样本孔分别加液 50μL。

一步法添加酶结合物：每孔加入 HRP 标记检测抗体 100μL，封板摇晃混匀板面。

恒温孵育：37℃避光孵育 74min。

洗板除游离组分：洗板 5 次，每次浸泡 35s，彻底吸干孔内水分。

底物显色：显色混合液 100μL / 孔，37℃避光显色 16min。

终止测 OD：加入终止液，15min 内 450nm 读数，计算 Col Ⅳ 含量。
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