人A组链球菌菌壁多糖抗体(ASP)ELISA试剂盒

本试剂盒基于间接ELISA检测原理，将纯化的人A组链球菌菌壁多糖抗原包被在酶标板上，样本中存在的ASP可与固相抗原特异性结合，随后加入酶标记的抗人IgG抗体并与之结合，洗板去除未结合杂质后，经底物催化显色、终止反应步骤，通过检测吸光度数值，参照标准曲线定量检测样本中人A组链球菌菌壁多糖抗体的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人A组链球菌菌壁多糖抗体(ASP)ELISA试剂盒

英文名称：ASP ELISA Kit
货号：Y-E2685

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出限0.5U/mL，可灵敏捕捉低浓度ASP抗体表达变化

检测范围：1U/mL - 32U/mL，适配临床血清、血浆样本中ASP抗体检测需求

反应时间：分步反应总时长120分钟，抗原抗体结合充分，保障检测准确度

保存条件：全套试剂2-8℃恒温冷藏，洗板液室温密封保存即可

有效期：原装未拆封有效期12个月，开封后试剂需密封冷藏，2周内使用完毕

特异性：专一结合人A组链球菌菌壁多糖抗体，与其他菌群抗体、人体正常免疫球蛋白无交叉反应

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%，批间、批内检测差异小

注意事项：血清样本需离心去除溶血、脂血杂质，孵育温度需恒定37℃，洗板步骤需彻底避免残留杂质影响结果
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒组分室温回温 25min，按说明书比例稀释浓缩洗涤液配制成工作洗涤液，梯度稀释 ASP 标准品，设置酶标板标准孔、待测样本孔、空白孔并编号区分。

标准品孔依次加入 50μL 不同浓度 ASP 标准品，样本孔添加 50μL 离心澄清后的待测体液样本，空白孔添加 50μL 样本稀释液，加样过程枪头不触碰孔底固相包被层。

所有孔一次性加入 100μL 一步法酶标记抗体混合工作液，封板膜严实封板，37℃避光水浴孵育 45min，保证反应体系稳定结合。

弃去孔中反应液，每孔注满洗涤液浸泡 35s 后弃液，连续洗板 4 次，最后一次洗板后倒扣酶标板于吸水纸彻底拍干残留洗液。

每孔加入 TMB 显色液 100μL，避光 37℃孵育显色 12min，严禁强光直射酶标板防止底物提前氧化失效。

按顺序每孔加入 50μL 硫酸终止液，轻微震荡酶标板使孔内液体充分混匀，立刻终止显色反应。

酶标仪 450nm 波长测定各孔吸光值，拟合标准曲线方程，代入样本 OD 值换算得出样本 ASP 抗体含量。
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