人C型凝集素结构域家族4成员E(CLEC4E)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术，酶标板微孔包被有特异性识别人人CLEC4E蛋白的单克隆抗体，孵育加入待测样本与标准品后，样本内CLEC4E抗原与固相抗体特异性结合，洗板去除非特异性结合物质，再加入HRP标记的抗CLEC4E检测抗体，形成夹心式免疫复合物，通过TMB底物显色、硫酸终止液终止反应后，检测样本吸光度，对照标准曲线即可定量测定样本中CLEC4E蛋白的含量。
基本参数‌：

产品名称：人C型凝集素结构域家族4成员E(CLEC4E)ELISA试剂盒

英文名称：CLEC4E ELISA Kit
货号：Y-E2593

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测灵敏度0.15ng/mL，可精准检测低丰度CLEC4E蛋白表达

检测范围：0.3ng/mL - 12ng/mL，覆盖免疫炎症模型样本表达区间

反应时间：标准实验时长100分钟，包含一抗、二抗分步温育反应

保存条件：试剂盒2-8℃冷藏保存，酶标板开封后需密封防潮，防止孔位失效

有效期：常规储存条件下有效期12个月

特异性：专一结合人CLEC4E抗原，与其他C型凝集素家族蛋白无交叉反应，特异性极强

重复性：板内、板间变异系数均＜10%，满足科研实验数据标准

注意事项：避免样本溶血、脂血，浑浊样本需预处理；所有耗材需无酶无菌，防止蛋白降解
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒全部试剂室温放置 35min，稀释浓缩洗涤液；用标准品稀释液溶解 CLEC4E 冻干标准品，倍比稀释成 6 个浓度梯度。

酶标板标记孔位，标准品孔、样本孔分别加入对应液体 100μL，空白孔添加稀释液，避免孔间交叉污染。

一步法同步向所有检测孔添加辣根过氧化物酶标记二抗工作液 100μL，轻微振荡混匀后封板。

37℃恒温封闭孵育 70min，孵育环境保持湿度稳定。

弃液洗板，每孔灌满洗涤液静置 40s 后拍干，循环洗板 5 次，吸水纸彻底吸干孔底残液。

每孔先后加入显色 A、B 液各 50μL，避光常温显色 18min。

滴加终止液终止反应，10min 内在 450nm 波长检测 OD 值，绘制标准曲线计算 CLEC4E 表达量。
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