本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附原理，酶标板微孔包被抗人P-gp特异性抗体，加入标准品及待测细胞、组织样本，样本中的P糖蛋白与固相抗体特异性结合，充分洗涤后加入HRP标记的P-gp检测抗体，构建稳定的免疫复合物，经显色、终止反应后检测OD值，通过标准曲线定量检测样本中P-gp的含量，反映肿瘤多药耐药水平。
基本参数：
产品名称：人P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)ELISA试剂盒
英文名称：P-gp Elisa Kit
货号：Y-E225
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测灵敏度0.13ng/mL，适配肿瘤耐药蛋白微量检测
检测范围：0.26ng/mL - 28ng/mL，覆盖肿瘤耐药、药物转运相关样本区间
反应时间：全流程实验时长98分钟
保存条件：2-8℃密封保存，禁止冷冻，防止膜蛋白抗原失活
有效期：未开封有效期12个月
特异性：专一识别人P-gp蛋白，无转运蛋白家族交叉反应
重复性：板内、板间变异系数均＜8%
注意事项：细胞、组织样本充分裂解破壁；避免样本氧化，保证抗原完整性
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
实验前室温平衡试剂盒 30min，稀释洗涤液，溶解标准品并配置 5 组梯度浓度，划分酶标板实验组别。
空白孔添加样本稀释液，标准品孔加入对应浓度标品，样本孔加入预处理待测样本，精准加样。
不吸取孔内原有液体，直接添加酶标记二抗工作液，封板封闭微孔板。
37℃恒温避光孵育 62min，孵育过程杜绝强光照射。
弃液后每孔加满洗涤液浸泡 32s，重复洗板 5 次，吸水纸充分拍干微孔。
加入显色 A、B 液，避光显色 15min，梯度显色清晰后终止反应。
终止液加入混匀，酶标仪 450nm 读取 OD 值，定量检测样本 P-gp 蛋白含量。
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