本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，酶标板预先包被抗人RHOB特异性抗体，加入梯度标准品及待测细胞、组织样本，样本中的RHOB蛋白与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入HRP标记的RHOB检测抗体，构建夹心免疫复合物，经TMB显色、终止反应后检测OD值，精准定量样本中RHOB蛋白的表达水平。
基本参数：
产品名称：人ras同源物基因家族成员b(RHOB)ELISA试剂盒
英文名称：RHOB ELISA Kit
货号：Y-E2586
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度≤0.1ng/mL，可精准检测细胞、组织样本中微量RHOB蛋白
检测范围：1.25-80ng/mL，适配肿瘤、细胞凋亡相关科研样本检测
反应时间：全程反应时长2.8h，孵育步骤分步进行，操作节奏可控
保存条件：试剂盒2-8℃避光密封保存，标准品、抗体浓缩液需单独密封存放，防止挥发、失活，严禁冷冻
有效期：未开封有效期6个月，长期存放需定期检查试剂澄清度，浑浊试剂禁止使用
特异性：专一识别人人源RHOB蛋白，与RHOA、RHOC等同家族蛋白无交叉反应，检测特异性高
重复性：板内变异系数＜9%，板间变异系数＜11%，实验数据重复性达标
注意事项：样本提取后需在24h内完成检测，避免蛋白降解；标准品梯度稀释需精准操作，保证标准曲线线性度；洗板需彻底，残留洗液会造成背景偏高；试剂盒组分不可与其他品牌试剂混用；仅用于科研，禁止临床应用
储存与有效期：
未开封整套试剂盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷冻；有效期 12 个月。
开封后保存
剩余酶标板条：自封袋密封，内置干燥剂 2～8℃避光；1 个月内用完。
HRP 酶结合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。
浓缩洗涤液：2～30℃常温保存，结晶温水溶解不影响效果。
复溶后标准品：分装 - 20℃冻存，避免反复冻融，1 个月内使用。
过期试剂禁止使用。
实验步骤如下：
试剂室温平衡 29min，按说明稀释洗涤缓冲液，标准品溶解静置 10min 后配制梯度浓度，标记酶标板。
空白孔添加稀释液，标准孔加入系列标品，待测孔加入裂解后组织 / 细胞上清样本，垂直加样避免挂壁。
一步法直接添加酶偶联抗体工作液，轻晃板面混匀液体，封板密封微孔。
37℃避光孵育 59min，孵育环境温度稳定无波动。
弃去孔内混合液，洗涤液加满浸泡 29s，洗板 4 次后用力拍干微孔。
加入 TMB 显色底物，避光显色 14min，确认梯度显色正常。
终止液终止反应，450nm 波长读数，依据标准曲线计算 RHOB 蛋白含量。
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