本试剂盒基于抗原抗体特异性结合与酶促显色放大原理,采用双抗体夹心ELISA法,微孔板固相包被人T细胞活化连接蛋白(LAT)特异性抗体,孵育过程中样本内的LAT抗原与固相抗体结合,洗板去除未结合物质后,加入HRP标记的LAT检测抗体形成免疫复合物,经洗涤去除游离酶标抗体,加入底物液显色,终止反应后测定吸光度,样本中LAT含量越高,显色越深、吸光度值越高,可精准定量检测LAT浓度。
基本参数:

产品名称:人T细胞活化连接蛋白(LAT)ELISA试剂盒
英文名称:LAT ELISA Kit
货号:Y-E2962
规格:48T/96T
1.灵敏度:最低检测浓度≤3.5pg/mL
2.检测范围:7pg/mL - 224pg/mL
3.反应时间:包被孔孵育 65min,二抗 35min,避光显色 16min
4.显色系统:A/B 分体式 TMB 显色液
5.检测波长:450nm
6.特异性:针对人 LAT 全长蛋白,与衔接蛋白家族其他分子无交叉反应
7.重复性:板内变异<5.8%,板间变异<9%
8.注意事项:细胞裂解样本需离心去除沉淀,否则易造成孔底浑浊干扰读数
关键注意事项:

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书,不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存,未用完的试剂需密封后放回规定温度(通常2-8℃或-20℃)
避免试剂污染,不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖,防止出现假阳性结果
显色过程需避光,避免阳光直射影响结果
实验步骤如下:

1. 试剂与样本室温平衡 28min,配制洗涤工作液,标准品梯度稀释,浑浊样本 12000r/min 离心 5min 取上清备用。
2. 划分空白孔、标准品孔、待测样本孔,标准孔加梯度标准品 50μL,样本孔加入上清待测液 50μL,空白孔不添加任何液体。
3. 所有实验组孔加入酶标记二抗工作液 100μL,封板密封,轻摇酶标板使反应体系混匀。
4. 37℃恒温孵育 55min,孵育过程酶标板平放不可倾斜。
5. 弃去孔内液体,洗涤液浸泡每孔 28s 后甩干,连续洗板 4 次,滤纸吸干板孔多余水分。
6. 避光依次加入显色液 A、B 各 50μL,震荡混匀,37℃避光显色 16min。
7. 加入终止液终止酶促显色反应,酶标仪测定吸光值,绘制标准曲线计算样本 LAT 蛋白浓度。
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