人α1抗胰糜蛋白酶(AACT)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板表面包被人α1抗胰糜蛋白酶（AACT）特异性特异性抗体，孵育时样本中的AACT抗原与固相抗体发生特异性免疫结合，洗板去除未结合组分后，加入HRP标记的AACT检测抗体形成稳定免疫复合物，洗涤纯化后加入显色底物触发酶促显色反应，终止反应后通过酶标仪测定吸光度，吸光度数值可精准反映样本中AACT的浓度水平。
基本参数‌：

产品名称：人α1抗胰糜蛋白酶(AACT)ELISA试剂盒

英文名称：AACT   Elisa Kit
货号：Y-E337

规格：48T/96T

1.灵敏度：最小可测≤0.22μg/mL

2.检测范围：0.45μg/mL - 14.4μg/mL

3.反应时间：捕获孵育 88min，酶结合物 45min，显色 17min

4.显色系统：预混一体式 TMB 显色液

5.检测波长：450nm

6.特异性：专一靶向人 AACT，与 α1-AT 无明显交叉免疫反应

7.重复性：板内 CV＜7.3%，板间 CV＜10%

8.注意事项：微孔板未使用条板需放入铝箔袋密封冷藏防潮
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

1. 试剂与样本室温静置 29min，配制洗涤工作液，标准品梯度稀释，杂质样本离心 5min 取上清。

2. 标记酶标板孔位，标准品孔加入对应浓度标准品 50μL，样本孔加入上清待测液 50μL，空白孔空置。

3. 除空白孔外每孔添加酶标记二抗 100μL，封板膜封口，小幅晃动酶标板混匀。

4. 37℃密闭孵育 58min，孵育箱温度恒定无偏差。

5. 倒掉孔内反应液，洗涤液浸泡 29s 甩干，循环洗板 4 次，去除非特异性吸附杂质。

6. 避光依次加入显色 A、B 液各 50μL，震荡混匀，37℃避光显色 17min。

7. 加入终止液终止酶促反应，酶标仪读数，依据标准曲线定量 AACT 蛋白浓度。
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