人白介素受体相关激酶(IRAK)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，酶标板预先包被抗人IRAK特异性捕获抗体，加入待测样本与标准品后，其中的IRAK抗原与固相抗体特异性结合，充分洗板去除游离杂质与杂蛋白；再加入HRP标记的IRAK检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物，经底物显色、终止反应后，通过酶标仪检测吸光度，吸光度值与样本中IRAK含量呈正相关，借助标准曲线即可定量检测样本中IRAK的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：检出下限 0.28 ng/mL

检测范围：0.56 ng/mL ~ 36 ng/mL

反应时间：样本裂解液上清孵育 130min，二抗 70min，显色 18min

显色系统：即用型 TMB 显色液

检测波长：450nm，参考 650nm

特异性：特异性识别人 IRAK1 蛋白，不识别 IRAK2、IRAK4 亚型

重复性：板内 CV＜7.5%，板间 CV＜11%

注意事项：细胞样本需充分裂解，未裂解完全会导致结果偏低；避免反复冻融裂解样本
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

预包被微孔板室温放置 30min，标准品逐级稀释，组织裂解液样本稀释后使用。

每孔上样 100μL，空白孔稀释液补全，随即加入标记二抗工作液 65μL 密封。

37℃恒温孵育 92min。

洗涤液洗板 5 次，每轮浸泡 40s，彻底拍干孔内废液。

加入 HRP 底物结合液 100μL，室温孵育 33min。

显色 A、B 液各 50μL 加入混匀，避光反应 18min。

终止后酶标仪读值，根据标准曲线测算 IRAK 蛋白浓度。