人表面活性蛋白D(SP-D)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法定量检测样本中人表面活性蛋白D(SP-D)含量。试剂盒固相载体预固定SP-D特异性捕获抗体，孵育后样本中的SP-D与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合物质，加入生物素化检测抗体与酶标记链霉亲和素，构建稳定免疫复合物，底物显色强度随SP-D浓度升高而增强，检测吸光度并结合标准曲线，可准确测定样本中SP-D的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：0.095ng/mL

检测范围：0.19ng/mL～12.2ng/mL

反应时间：夹心法孵育 66min，酶结合二抗 34min，避光显色 16min

显色系统：双组份 TMB 显色液临用配比

检测波长：450nm

特异性：单克隆抗体靶向 SP-D，不结合其余肺表面活性蛋白家族成员

重复性：板内 CV＜6.3%，板间 CV＜9.3%

注意事项：微孔板开封后防潮保存，洗涤液出现浑浊禁止继续使用
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

设置对照孔与检测孔，一次性加入标准品、待测样本与生物素化抗体，封板 37℃孵育 68min，洗板 6 次。

洗涤工作液浸润微孔 20s 后弃液，多次洗涤后吸干板孔液体。

加入 HRP 亲和素溶液避光孵育 28min，再次洗板 5 次。

添加 TMB 显色液避光反应 12min，加入终止液终止显色。

酶标仪 450nm 测定各孔吸光度。

根据标准品数据构建定量曲线。

换算样本 SP-D 蛋白含量，核对复孔误差后确认结果。