人表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理测定样本中人表面膜免疫球蛋白A(mIgA)含量。酶标板预先包被mIgA特异性单克隆捕获抗体，加入待测样本与标准品孵育，样本中的mIgA与固相抗体特异性结合，洗涤纯化后加入配套酶标检测抗体，形成夹心免疫复合物，底物发生酶促显色反应，吸光度值与样本中mIgA浓度成正比，依据标准曲线可精准定量目标免疫球蛋白含量。
产品参数：

‌灵敏度：0.15μg/mL

检测范围：0.3μg/mL～19.2μg/mL

反应时间：细胞裂解样本孵育 58min，二抗 42min，显色 21min

显色系统：HRP-TMB 显色系统

检测波长：450nm，570nm 校正本底

特异性：仅识别细胞膜结合型 IgA，游离分泌型 sIgA 交叉反应＜4%

重复性：板内 CV≤7.0%，板间 CV≤10.0%

注意事项：细胞样本裂解后不可高温放置，避免膜蛋白降解失效
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

细胞裂解预处理样本与梯度标准品、酶标记抗体同步加至包被板，封板 37℃孵育 52min，洗板 4 次。

洗涤液灌满微孔静置 35s 倒掉废液，重复洗涤步骤，倒扣拍干微孔。

加入显色底物避光显色 16min。

加入终止液终止酶促显色反应，混匀液体。

酶标仪 450nm 读取 OD 吸光值。

拟合标准曲线，计算对应浓度参数。

校正样本稀释比例，得到 mIgA 最终检测浓度。