人多形核白细胞弹性蛋白酶(PMNElastase)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板预先包被人PMNElastase特异性捕获抗体，可特异性结合样本中的多形核白细胞弹性蛋白酶抗原，洗板去除未结合组分后，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成特异性免疫夹心复合物，经显色、终止、测光后，依据标准曲线精准定量样本中PMNElastase的活性与含量。
基本参数‌：

产品名称：人多形核白细胞弹性蛋白酶(PMNElastase)ELISA试剂盒

英文名称：PMNElastase Elisa Kit
货号：Y-E3035

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 0.06ng/mL

检测范围：0.19ng/mL～12.16ng/mL

反应时间：室温样本 98min，酶标抗体 54min，显色 19min

显色系统：双组份配比显色体系

检测波长：450nm，620nm 扣除微孔板底色

特异性：精准识别 PMN 来源弹性蛋白酶，其他丝氨酸蛋白酶无交叉

重复性：批内 CV≤6.9%，批间 CV≤10.9%

注意事项：化脓性体液样本需稀释检测，避免钩状效应
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 35min，配制洗涤工作液，拆分酶标板，仅留存实验所需微孔条，其余密封冷藏。

标准品孔、样本检测孔分别加入对应液体 50μL，空白孔不上样。

每孔加入酶联一步结合液 100μL，轻晃混匀，封板膜严实封口。

37℃恒温孵育 75min，稳定环境完成免疫反应。

撕膜弃液，洗涤液加满微孔静置 30s 拍干，洗板 6 次。

避光添加显色双液各 50μL，摇匀后 37℃显色 17min。

终止液终止反应，酶标仪 450nm 读数，标准曲线计算 PMNElastase 含量。
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