本试剂盒采用酶联免疫吸附夹心检测原理，微孔板预先包被人泛素连接酶(E3/UBPL)特异性抗体，孵育过程中样本内的E3/UBPL抗原与固相抗体结合，后续加入的酶标抗体与抗原结合形成免疫复合物，洗涤去除杂质后进行底物显色，通过检测吸光度值，对照标准曲线完成人E3/UBPL的定量检测。
基本参数：
产品名称：人泛素连接酶(E3/UBPL)ELISA试剂盒
英文名称：E3/UBPL Elisa Kit
货号：Y-E3064
规格：48T/96T
灵敏度：最低检出 0.10ng/mL
检测范围：0.3ng/mL - 30ng/mL
反应时间：封闭 30min，样本孵育 92min，二抗 48min，显色 23min
显色系统：A+B 双组份 TMB 混合后使用，硫酸终止
检测波长：450nm/620nm 双波长
特异性：识别人 E3 泛素连接酶核心片段，上游 E1/E2 无明显交叉结合
重复性：板内 CV≤7.1%，板间 CV≤9.4%
注意事项：组织匀浆上清需 12000rpm 高速离心去除沉淀杂质后上样
实验前准备工作：
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释：
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。
待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：
试剂盒全部组分室温放置 33min，稀释洗涤液与标准稀释液，制备 E3 系列浓度标准品，排版标记孔位。
各孔添加检测液 50μL，随即加入一步法免疫酶工作液 100μL，封板膜密封酶标板。
37℃恒温避光孵育 62min，保持孵育温度稳定。
撕开封板弃液，洗涤液浸泡每孔 28s，拍净液体，循环洗板 6 次。
每孔加入显色混合液 100μL，避光显色 14min。
滴加终止液 50μL 终止酶促反应，摇晃混匀。
450nm 读取 OD 数值，换算样本 E3/UBPL 检测结果。
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