人钙网蛋白(CRT)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，在酶标板微孔内包被人钙网蛋白特异性单克隆抗体，待测样本中的CRT抗原与包被抗体特异性结合，随后加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体形成免疫复合物，洗板去除游离组分后，底物显色产物的吸光度值与样本中CRT含量呈线性相关，依据标准曲线可定量检测人钙网蛋白的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测 2.5pg/mL

检测范围：8pg/mL～256pg/mL

反应时间：37℃孵育 70min，酶结合物 45min，显色 14min

显色系统：单液 TMB 显色体系

检测波长：450nm，参考 630nm

特异性：特异性识别钙网蛋白，与钙联蛋白无交叉吸附

重复性：批内 CV＜8%，批间 CV＜10.2%

注意事项：溶血、脂血严重样本直接舍弃不用；洗板机洗板设置浸泡时间不少于 30s
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

公司正在出售的产品：

实验操作流程：

试剂盒室温回温 29min，配制多浓度标准品，微孔板编号分孔，每孔加入样本或标准品 54μL，空白孔空置。

各孔加入酶结合工作液 96μL，封板膜密封，摇床低速振荡混匀 1min。

37℃避光孵育 56min，避免强光照射微孔板。

去除封板膜弃净废液，洗板液浸泡每孔 38s，洗板 5 次，倒扣板条拍干余液。

依次添加显色 A 液、B 液各 50μL，37℃避光显色 12min。

加注终止液 50μL 混匀终止反应。

酶标仪 450nm 测定 OD 值，拟合标准曲线定量钙网蛋白。