本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理,酶标板微孔固相包被人ITAC/CXCL11特异性捕获抗体,孵育后样本中的趋化因子抗原与包被抗体特异性结合,加入酶标记检测抗体形成免疫夹心复合物,洗板除杂后进行酶促显色,显色深浅与样本中ITAC/CXCL11含量成正比,通过标准曲线换算可精准定量。
产品参数:
产品名称 | 人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)ELISA试剂盒 | 货号 | Y-E059 |
英文名称 | I-TAC Elisa Kit | 规格 | 48T/96T |
灵敏度:检出下限 0.8pg/mL
检测范围:2.5pg/mL~80pg/mL
反应时间:样本孵育 55min,酶标记二抗 45min,显色 13min
显色系统:单液型 TMB 显色液
检测波长:450nm
特异性:精准识别 CXCL11,与 CXCL10、CXCL9 无明显交叉结合
重复性:板内 CV≤7.1%,板间 CV≤9.4%
注意事项:细胞上清样本低温保存运输;显色反应必须避光密闭
实验前准备工作:
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分(酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液)从 2~8℃取出,室温(20~25℃)放置平衡 30min,严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制:按标签标注比例用去离子纯水稀释(常见 20× 浓缩液:1 份浓缩液 + 19 份纯水),混匀备用,现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释:
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解,室温静置 10min,轻柔吹打混匀;
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品,单独标记,剩余原液分装 - 20℃避光保存,避免反复冻融。
待测样本预处理:血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释,浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清;溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备:恒温 37℃孵育箱、酶标仪(450nm 主波长,630nm 参比)、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机(或手动洗板槽)、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染,移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条,剩余未使用板条装入铝箔密封袋,加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记:空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔(所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差)。
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实验操作流程:
试剂盒室温静置 31min 回温,配制标准品稀释梯度,酶标板分孔标记,每孔加入待测样本或标准品 46μL,空白孔空置。
各孔加入酶联工作液 104μL,封板膜封口,摇床低速振荡 1min 混匀体系。
37℃避光孵育 58min,避免强光照射微孔板。
去除封板膜弃净液体,洗板液浸泡每孔 41s,连续洗板 4 次,彻底拍干微孔水分。
每孔加入显色液 A、B 各 50μL,避光 37℃显色 13min。
滴加终止液 50μL 轻晃混匀终止显色。
酶标仪 450nm 检测吸光度,拟合标准曲线计算 CXCL11 含量。
关键字: 人干扰素诱导T细胞趋化因子;ITAC/CXCL11;ELISA试剂盒;
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