人广谱细胞角蛋白(P-CK)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测人广谱细胞角蛋白（P-CK）水平，微孔板固相包被人P-CK特异性捕获抗体，加入待测样本后，样本中的广谱细胞角蛋白与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质，再加入酶标记的P-CK检测抗体形成免疫复合物，经底物显色、终止反应后，测定样本吸光度值，其数值与样本中P-CK含量呈正相关，通过标准曲线拟合可精准定量检测样本中目标指标浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出 0.15U/mL

检测范围：0.3U/mL～90U/mL

反应时间：恒温 37℃孵育 65min，后续流程 80min，全程 145min

显色系统：单液型稳定 TMB 显色液

检测波长：450nm，参比 620nm

特异性：识别多种上皮来源广谱 CK 亚型，间质蛋白无结合

重复性：批内 CV≤6.8%，批间 CV≤9.8%

注意事项：胸腹水样本需离心去除细胞沉淀后再检测
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒全部试剂室温回温 30min，配制工作洗涤液，取出包被微孔板条固定于板架。

用配套稀释液配制 P-CK 系列梯度标准品，待测体液、组织匀浆样本离心取上清稀释备用。

各微孔依次加入标准品、待测样本、空白对照液，同步加入酶结合工作液，封板膜封板。

室温避光孵育 70min，完成一步法免疫夹心反应。

去除封板膜，倒掉孔内液体，洗涤液注满每孔浸泡 30s，拍干洗板，重复 6 次。

每孔加入显色 A、B 液混匀，避光显色 20min。

终止液终止显色，酶标仪 450nm 测 OD 值，拟合标准曲线定量 P-CK 浓度。