人抗核糖核蛋白抗体(RNP-Ab)ELISA试剂盒

本试剂盒采用经典间接酶联免疫吸附法，将纯化的人核糖核蛋白抗原固定于酶标板固相载体，待测样本中的抗核糖核蛋白抗体可与固相抗原特异性结合；洗涤去除未结合杂蛋白后，加入酶标记二抗与结合的RNP-Ab抗体配对结合，孵育洗涤后加入底物进行酶促显色，终止反应后检测吸光度，依据显色深浅及标准曲线，定量测定样本中RNP-Ab的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人抗核糖核蛋白抗体(RNP-Ab)ELISA试剂盒

英文名称：RNP-Ab  Elisa Kit
货号：Y-E478

规格：48T/96T

灵敏度：检出下限 0.75AU/mL

检测范围：0.8AU/mL～20AU/mL

反应时间：室温孵育 60min；二抗 30min；显色 15min

保存条件：试剂盒 2～8℃储存，终止液常温保存即可

显色系统：HRP 介导 TMB 单液显色

检测波长：450nm，参比 600nm

标准曲线绘制：采用四参数拟合建立标准曲线，批量样本自动换算浓度

注意事项：微孔板不可重复使用；移液枪枪头一次性更换，杜绝交叉污染
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

样本处理：人血清 1:100 稀释，颠倒混匀 8 次，室温静置 7min。

分孔加样：每孔加入对应试液 100μL，做好样本编号记录。

一步法直接添加酶标记二抗 100μL，封板密封。

37℃恒温避光孵育 52min。

洗板 5 次，每孔浸泡 30s 后拍净残液。

显色液 A、B 各 50μL，混匀显色 15min。

终止后酶标仪 450nm 测值，计算抗体含量。
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