人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测人花生四烯酸5脂加氧酶（ALOX-5）含量，微孔板预先包被ALOX-5特异性捕获抗体，待测样本中的目标酶抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质，加入酶标记检测抗体构建稳定免疫复合物，经底物显色、终止反应后检测吸光度，吸光度值与样本中ALOX-5浓度成正比，通过标准曲线可精准定量检测目标酶水平。
产品参数：

‌灵敏度：检测限 0.05ng/mL

检测范围：0.04ng/mL～42ng/mL

反应时间：37℃温育 54min，后续流程 76min，全程 131min

显色系统：OPD 显色盐酸终止

检测波长：492nm

特异性：仅 ALOX5，不识别 ALOX12、ALOX15 同工酶

重复性：板内 CV＜5.6%，板间 CV＜8.6%

注意事项：全程避光，脂氧酶极易光照失活
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温回温 30min，配比稀释洗涤液，固定微孔板条至板架。

配制 ALOX-5 梯度标准品，组织匀浆上清样本离心去除沉淀后稀释。

每孔加入标准品、待测样本、空白稀释液，同步加入酶标记工作液，覆膜封板。

37℃避光孵育 53min。

弃净液体，洗涤液浸泡 30s，拍干洗板，重复 6 轮洗涤。

TMB 显色液加入微孔，避光显色 13min。

终止液终止反应，450nm 酶标仪测吸光度，标准曲线检测 ALOX-5 浓度。