人激肽释放酶6(KLK6)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测方法，固相载体包被KLK6特异性捕获抗体，待测样本中的激肽释放酶6与固相抗体特异性免疫结合，随后加入酶标记KLK6检测抗体形成夹心复合物，经洗涤纯化后加入底物发生酶促显色反应，产物吸光度值与样本中KLK6含量成正比，依据标准曲线可精准定量样本中KLK6的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：≤0.09ng/mL

检测范围：0.22ng/mL~7.04ng/mL

反应时间：样本孵育 70min；二抗 34min；显色 14min

保存条件：试剂盒 2~8℃，浓缩稀释液不可冷冻结冰

显色系统：双组分 TMB 显色体系

检测波长：450nm

标准曲线绘制：设置空白孔归零后线性绘制标准曲线，稀释样本换算原始浓度

注意事项：所有试剂回温至室温后再进行实验，防止温差导致孔间差异
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

样本预处理：脑脊液、血清样本稀释处理，过滤去除絮状杂质备用。

微孔板上样：KLK6 预包被板设置复孔对照，每孔加入对应液体 100μL。

共加酶标记工作液：无需预洗板，加入酶标记检测抗体 60μL，封板混匀。

避光孵育结合：37℃恒温孵育 61min。

洗板除杂：洗板 4 次，每次浸泡 32s，彻底吸干废液。

底物显色：加入 TMB 显色液避光显色 13min。

终止上机检测：终止液终止酶促反应，450nm 读取吸光度定量 KLK6。