人解整合素样金属蛋白酶10(ADAM10)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附原理，微孔板包被人ADAM10特异性捕获抗体，待测样本中的解整合素样金属蛋白酶10抗原与固相抗体特异性结合；孵育洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的ADAM10检测抗体，形成完整的免疫夹心复合物；去除游离反应物后进行酶促显色，产物吸光度与样本中ADAM10含量正相关，结合标准曲线可精准定量检测样本中靶蛋白酶含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出限 0.07ng/mL

检测范围：0.15~9.6ng/mL

反应时间：样本温育 105min，酶标记抗体 62min，避光显色 21min

保存条件：试剂盒 2~8℃冷藏，浓缩洗涤液室温避光存放

显色系统：A、B 液分开储存，临用前等量混合显色

检测波长：450nm 单波长测定

标准曲线绘制：四参数非线性拟合标准曲线，精准定量样本蛋白含量

注意事项：组织匀浆需添加蛋白酶抑制剂；禁止干孔孵育；洗板后拍干孔内残留液体
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂常温复温 29min，拆分酶标板条，排布标准孔、样品孔、空白孔，每孔上样稀释待测液 100μL，空白孔补稀释缓冲液。

直接添加酶结合抗体液 60μL，轻微震荡混匀，封板膜密封板面。

37℃恒温孵育 63min，全程避光保存酶标板。

去膜倒出废液，洗涤液加满每孔静置 40s 后拍干，循环洗板 4 次。

每孔加入显色底物 A、B 各 50μL，遮光条件下显色 16min。

滴加终止液 50μL 并充分混匀，终止催化反应。

450nm 检测吸光度，对照标准曲线计算 ADAM10 蛋白浓度。