人免疫球蛋白重链(IgH)ELISA试剂盒

本试剂盒采用酶联免疫双抗体夹心检测原理，固相酶标板包被人IgH特异性捕获抗体，待测样本中的免疫球蛋白重链与抗体特异性结合，加入酶标记检测抗体形成完整夹心免疫结构，经洗涤去除未结合反应物后进行底物显色，终止反应后测定OD值，结合标准曲线即可定量检测样本中IgH的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：3.2 μg/mL

检测范围：12μg/mL～850μg/mL

反应时间：室温孵育 105min，二抗 46min，显色 20min，总 171min

保存条件：试剂盒 2-8℃，浓缩洗涤液室温放置

显色系统：OPD 显色底物，硫酸终止

检测波长：492nm

标准曲线绘制：5 个浓度梯度，最小二乘法拟合

注意事项：样本避免反复冻融超过 2 次，蛋白降解会降低检测数值
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

工作液调配：稀释浓缩洗涤液，梯度稀释 IgH 标准品，待测样本去除杂质沉淀。

微孔加样：标准孔、样本孔、阴性对照孔分别加液 100μL，防止液体交叉污染。

酶标抗体共加：每孔加入 HRP 标记 IgH 检测抗体 100μL，封板密封。

孵育反应：37℃避光孵育 60min。

洗板流程：倒掉废液，洗液浸泡 35s 后拍干，循环洗板 6 次。

显色反应：添加显色 A、B 液各 50μL，暗处显色 14min。

终止定量：终止液终止显色，酶标仪 450nm 读数，依据标准曲线计算 IgH 浓度。