本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，微孔板包被人GROα/CXCL1/MGSA特异性抗体，待测样本、标准品中的靶标抗原与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成特异性免疫夹心复合物，底物显色后终止反应，酶标仪检测吸光度，吸光度值与样本中GROα/CXCL1/MGSA的含量呈正相关，结合标准曲线可完成定量检测。
基本参数：
产品名称：人生长调节致癌基因α/黑素瘤生长刺激因子(GROα/CXCL1/MGSA)ELISA试剂盒
英文名称：GROα/MGSA Elisa Kit
货号：Y-E281
规格：48T/96T
灵敏度：检出下限 1.9pg/mL
检测范围：10pg/mL ~ 750pg/mL
反应时间：37℃孵育 78min，二抗温育 49min，底物显色 20min，总耗时 2h27min
保存条件：未拆封 2~8℃，板条拆分后装入自封袋加干燥剂冷藏，浓缩试剂避免反复冻融
显色系统：双液混合显色，2mol/L H₂SO₄终止
检测波长：450nm 单波长检测
标准曲线绘制：四参数拟合曲线，8 个标准梯度，空白孔扣除本底
注意事项：炎症样本浓度易超标，超出范围需梯度稀释重测；操作全程避免手部触碰板孔底部
实验前准备工作：
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释：
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。
待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：
试剂室温放置 33min，稀释浓缩洗涤液，梯度配制 GROα 标准品，拆分酶标板条。
标准品孔加 50μL 梯度标准溶液；待测孔加 46μL 稀释液 + 14μL 待测样本；空白孔不加试剂。
除空白孔外每孔加入酶标记特异性抗体 100μL，封板 37℃孵育 68min。
倒掉孔内废液，洗涤液浸泡 40s 后甩干，洗板 6 次，彻底拍干板内液体。
每孔加入显色 A、B 液各 50μL，轻微震荡，37℃避光显色 17min。
加入终止液 50μL 混匀终止反应。
450nm 读取 OD 值，拟合标准曲线定量样本 GROα 浓度。
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