人可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附原理，微孔板包被抗人VEGFR-2特异性单克隆抗体，待测样本中的可溶性血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2）抗原与固相抗体结合，加入酶标记配对抗体形成夹心复合物，显色后检测吸光度，依据标准曲线精准定量样本中VEGFR-2含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出限≤0.25 ng/mL

检测范围：0.156 ng/mL ~ 10 ng/mL

反应时间：孵育 90min，二抗 52min，显色 21min

保存条件：2~8℃冷藏，剩余板条密封防潮防干

显色系统：双组份 TMB 显色体系

检测波长：450nm，参比 620nm

标准曲线绘制：软件自动录入标准品数据生成四参数标准曲线

注意事项：抗凝血浆优先 EDTA 抗凝，肝素抗凝易抑制酶促反应
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温复温 33min，取出酶标板，划分空白、对照、标准、待测孔位。

除空白孔外每孔加样 50μL，立刻加入酶工作液 50μL，严实封板。

低速振荡混匀微孔内液体，37℃孵育 66min。

倒净废液，洗涤液浸泡 36s，拍干，洗板 6 次。

显色 A、B 液各 50μL，避光显色 18min。

加入终止液 50μL 混匀终止。

酶标仪 450nm 测 OD 值，换算 VEGFR-2/sFLK-1 含量。