本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理,在酶标板微孔中固定特异性抗人葡萄球菌蛋白A抗体。加入待测样本与标准品后,样本中的葡萄球菌蛋白A抗原与固相抗体发生特异性免疫结合,洗除未结合杂质后,加入酶标记特异性抗体形成免疫复合物,充分反应并洗涤干净后,加入显色底物发生酶促显色反应,终止反应后通过酶标仪检测吸光度,根据标准品浓度与对应吸光度绘制标准曲线,即可定量检测样本中人葡萄球菌蛋白A的含量。
产品参数:
产品名称 | 人葡萄球菌蛋白A(SPA)ELISA试剂盒 | 货号 | Y-E794 |
英文名称 | SPA Elisa Kit | 规格 | 48T/96T |
灵敏度:检出下限 0.08ng/mL
检测范围:0.2ng/mL~12.8ng/mL
反应时间:包被板加样后室温孵育 70min,二抗 37℃孵育 55min,显色 20min
保存条件:试剂盒整体 2~8℃避光;剩余试剂分装冻存 - 20℃可延长保存 3 个月,避免反复冻融
显色系统:HRP 催化 TMB 显色,硫酸终止反应变黄
检测波长:450nm/620nm 双波长校正读数
标准曲线绘制:选用五次多项式拟合曲线匹配标准品梯度 OD 数据
注意事项:操作全程避免交叉加样枪头混用;终止液具备腐蚀性,禁止徒手直接触碰
试剂盒组成:
预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原,结合目标物
标准品 6支/套 制备标准曲线,定量检测依据
生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物,提供酶结合位点
辣根过氧化物酶(HRP)标记亲和素 1瓶 与生物素结合,催化底物显色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物,产生颜色变化
终止液 1瓶 终止酶促反应,稳定显色结果
浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板,去除未结合物质
封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发
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实验操作流程:
全部试剂室温放置 30min 化开结晶,稀释浓缩洗涤液;固定酶标板框架,区分标准品、待测、空白孔位。
标准品孔加入倍比稀释 SPA 标准品 50μL,样本孔上样稀释后待测液 50μL,空白孔无添加。
每孔加入一步法 SPA 酶标记检测抗体 100μL,封板膜严实密封板孔。
37℃恒温培养箱避光孵育 65min,保证抗原抗体充分结合。
弃液洗板,每孔加满洗涤液静置 40s,甩出液体,重复洗板 5 次,倒置板条在吸水纸上拍干。
每孔等量加入显色底物 A、B 液各 50μL,避光 37℃显色 18min。
滴加终止液 50μL 混匀,450nm 波长检测 OD 值,通过标准曲线计算样本 SPA 浓度。
关键字: 人葡萄球菌蛋白A;SPA;ELISA试剂盒;
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