人葡萄糖激酶(GCK)ELISA试剂盒

本试剂盒以双抗体夹心ELISA为核心检测原理，将抗人葡萄糖激酶特异性抗体固定于酶标板微孔内壁。待测样本、梯度标准品加入微孔后，其中的葡萄糖激酶抗原与固相抗体特异性结合，经洗涤去除游离杂质后，加入酶标记二抗并孵育结合，形成稳定的固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，随后进行底物显色、终止反应操作，通过检测吸光度数值，结合标准曲线即可定量测定样本中葡萄糖激酶的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出 0.09ng/mL

检测范围：0.28ng/mL～17.9ng/mL

反应时间：加样后温育 58min，二抗孵育 52min，显色 17min

保存条件：试剂盒 2～8℃避光储存，不可倒置存放；浓缩试剂使用前充分颠倒混匀

显色系统：A、B 液等量混合现配 TMB 显色体系

检测波长：主 450nm，参比 650nm

标准曲线绘制：线性最小二乘法回归绘制标准曲线

注意事项：底物液需避光保存，见光氧化失效后不得继续使用
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温回温 30min，稀释浓缩洗涤缓冲液；拆分酶标板条并标注组别。

标准品孔添加梯度稀释 GCK 标准品 50μL，样本孔加入处理后待测样本 50μL，空白孔空置。

各检测孔加入一步法酶标记一抗工作液 100μL，封板密封酶标板。

37℃避光条件下孵育 70min，减少环境光线干扰。

弃净孔内液体，洗涤液洗板每次浸泡 35s，一共洗涤 4 次，吸水纸拍干残余液体。

每孔加入显色底物混合液 100μL，37℃避光显色 16min。

加入终止液 50μL 混匀，10min 内 450nm 测 OD 值，计算样本 GCK 浓度。