人锚蛋白B(Ank-B)ELISA试剂盒

本试剂盒基于经典ELISA双抗体夹心检测原理，在酶标板固相载体上包被人Ank-B特异性单克隆抗体，孵育过程中样本及标准品中的Ank-B抗原与包被抗体特异性免疫结合，随后加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成特异性免疫复合物，洗涤去除游离组分后，底物在酶的催化下发生显色反应，颜色深浅与样本中Ank-B含量呈正相关，通过检测吸光度并拟合标准曲线，可定量检测样本中锚蛋白B的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低可测 0.85 ng/mL

检测范围：5ng/mL～320ng/mL

反应时间：一抗室温孵育 90min，二抗避光 45min，显色 20min，全程 155min

保存条件：未开封试剂盒 2-8℃冷藏，开封后封膜防潮，浓缩洗涤液室温存放即可

显色系统：双组份 A/B 显色底物混合使用，酸性终止液终止反应

检测波长：单波长 450nm 直接读数

标准曲线绘制：6 个浓度梯度，线性回归法拟合标准曲线，剔除偏差大于 15% 的复孔数值

注意事项：样本需离心去除细胞碎片，反复冻融样本检测结果偏差会大于 20%
试剂盒组成：

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物

标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据

生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点

辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化

终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果

浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质

封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发

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实验操作流程：

试剂预处理：取出试剂盒内所有组分室温平衡 25min，稀释浓缩洗涤液至工作浓度，配制 Ank-B 标准品梯度稀释液。

排布加样：设定标准品孔、待测样本孔、阴性对照孔，每孔加入对应液体 100μL，悬空滴加防止交叉污染。

一步酶标抗体孵育：每孔加入酶标记 Ank-B 特异性抗体 100μL，封板后水平摇晃酶标板 1min。

温育反应：37℃避光孵育 45min，保证抗原抗体充分特异性结合。

洗板除杂：倾倒孔内废液，洗板液注满每孔，静置 20s 后倒扣拍净，连续洗板 4 次。

底物显色：每孔单步加入混合显色工作液 100μL，暗处反应 12min，严控显色时长避免过曝。

终止检测：加终止液终止反应，酶标仪 450nm 读取吸光度，拟合标准曲线换算样本 Ank-B 含量。